【摘 要】
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目的观察HBV靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease,TR)的体外抗病毒作用. 方法将包含HBV核心蛋白(HBVc)和人类嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN)编码基因克隆入pcDNA3.1(-),构建HBV TR重组真核表达载体p/TR.构建包含HBV核心蛋白、人类嗜酸性粒细胞来源的神经毒素以及突变失活的HBV TR编码基因的重组真核表达载体p/HBVc、p/hEDN、p/T
【机 构】
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710032,西安,第四军医大学病原生物学教研室,
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目的观察HBV靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease,TR)的体外抗病毒作用. 方法将包含HBV核心蛋白(HBVc)和人类嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN)编码基因克隆入pcDNA3.1(-),构建HBV TR重组真核表达载体p/TR.构建包含HBV核心蛋白、人类嗜酸性粒细胞来源的神经毒素以及突变失活的HBV TR编码基因的重组真核表达载体p/HBVc、p/hEDN、p/TRmut (hEDN的Lys113→Arg,失去其RNase活性)作为对照.脂质体转染p/TR、p/HBVc、p/hEDN、p/Trmut、pcDNA3.1(-)进入2.2.15细胞.转染后,RT-PCR证实转染基因的表达,通过观察转染细胞的形态核MTT法检测转基因表达的细胞毒性.用固相放免法测定转染细胞培养上清HBsAg浓度. 结果转基因在2.2.15细胞内都有表达,且对细胞无毒性.与空转染组相比,pcDNA3.1(-)/TR转染组HBsAg含量下降58%;对照各质粒无此变化. 结论 TR在体外可以抑制HBV复制,同时对宿主细胞无毒性.TR可以作为一种新型的抗病毒制剂治疗乙肝病毒感染.
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