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目的：为了获得A型产气荚膜梭菌C57株α毒素基因片段克隆质粒，作为实时定量PCR检测标本产气荚膜梭菌标准，以备临床应用。方法采用两轮高保真 PCR扩增 A 型产气荚膜梭菌 C57株α毒素基因片段（Cpa900），经EcoRⅠ酶切后插入质粒pUC19并连接，构建重组质粒pUC19-Cpa900，转化大肠埃希菌Top10感受态菌株并予以增菌后测序，并提取质粒进行实时定量PCR测试。结果 pUC19下游引物匹配Cpa900上、下游引物双PCR筛选电泳结果表明，116-2株中含单拷贝、反向插入pUC19的Cpa9