微小RNA-7同步干预表皮生长因子受体下游双通路抑制胶质瘤生长

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:adongjie
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目的 寻找微小RNA(miR)-7在表皮生长因子受体(EGFR)通路下游的作用靶点,探讨其抑制胶质瘤生长的内在机制.方法 瞬时转染人CHG5胶质瘤细胞miR-7寡核苷酸序列,实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-7水平;噻唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,Transwell小室实验检测瘤细胞迁移能力,软琼脂克隆形成实验检测瘤细胞致瘤潜能;Western blot方法检测磷酸肌醇3激酶(PI3K)、Raf-1、细胞周期素(Cyclin) D1、磷酸化苏氨酸激酶(p-AKT)和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)的蛋白表达;利用TargetScan和Saner软件共同分析预测miR-7的潜在靶点;荧光素酶实验验证miR-7与PI3K和Raf-1间的靶关系.结果 与脂质体组和无义序列组比较,miR-7组瘤细胞增殖速度减慢,瘤细胞迁移力降低,肿瘤克隆能力减弱(P<0.05);Western blot结果显示EGFR下游通路成员表达均有不同程度下降;荧光素酶实验证实PI3K和Raf-1均是miR-7的直接作用靶点.结论 miR-7通过同时调控EGFR下游PI3K/ATK和Raf/MEK/ERK两条通路发挥肿瘤生长抑制作用。

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