【摘 要】
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目的拟利用体外克隆表达的GPⅢa蛋白作为HPA-1a抗原与Luminex xMAP微球相连，建立和评估用Luminex微球技术检测血清中抗HPA-1a的效果。方法扩增并克隆GPⅢa蛋白的编码基因ITGB3至真核表达载体，转染中国仓鼠卵巢癌细胞株。利用G418筛选稳定表达细胞株，体外获取并鉴定相应的特异性膜糖蛋白GPⅢa。将重组蛋白通过表面游离氨基和Luminex xMAP微球表面激活的羧基相偶联，
【机 构】
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310006 杭州，浙江省血液中心，卫生部血液安全研究重点实验室，浙江省血液安全研究重点实验室,310006 杭州，浙江省血液中心，卫生部血液安全研究重点实验室，浙江省血液安全研究重点实验室,3100
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目的拟利用体外克隆表达的GPⅢa蛋白作为HPA-1a抗原与Luminex xMAP微球相连，建立和评估用Luminex微球技术检测血清中抗HPA-1a的效果。
方法扩增并克隆GPⅢa蛋白的编码基因ITGB3至真核表达载体，转染中国仓鼠卵巢癌细胞株。利用G418筛选稳定表达细胞株，体外获取并鉴定相应的特异性膜糖蛋白GPⅢa。将重组蛋白通过表面游离氨基和Luminex xMAP微球表面激活的羧基相偶联，再利用偶联后的微球与待测血清反应。利用PE-抗人IgG进行显色，在Luminex-100仪上读取数据并判断结果。
结果ITGB3基因测序为HPA-1aa，将克隆后的GPⅢa重组蛋白偶联Luminex xMAP微球，Luminex微球法检测HPA-1a抗体的灵敏度为滴度1/32(抗体浓度3.125 U/mL)。微球技术能特异性鉴别出待测样本的HPA-1a抗体，与MAIPA结果一致，而且与HLA抗体、ABO抗体以及其他HPA血小板系统抗体(HPA-3a、HPA-5b)均不发生交叉反应，说明建用立的Luminex微球技术来检测血小板抗体是可行的。
结论成功获取了重组表达的血小板膜蛋白GPⅢa，并初步建立了Luminex微球检测HPA-1a抗体方法。
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