【摘 要】
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目的：构建结核分支杆菌phoS2表达重组质粒,原核表达及纯化重组蛋白,并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定.方法：将目的基因亚克隆到pET32a表达载体,成功构建的重组质粒双酶切鉴定并测序.加IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定后,用含Ni2+的His-bind树脂柱亲和层析纯化phoS2,并用Western blot对其进行鉴定.应用DNAstar等生物分析软件对该蛋白的理化特性、跨
【机 构】
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宁夏医科大学检验学院 750004 宁夏银川市第一人民医院感染性疾病科 750001
【出 处】
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第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
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目的：构建结核分支杆菌phoS2表达重组质粒,原核表达及纯化重组蛋白,并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定.方法：将目的基因亚克隆到pET32a表达载体,成功构建的重组质粒双酶切鉴定并测序.加IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定后,用含Ni2+的His-bind树脂柱亲和层析纯化phoS2,并用Western blot对其进行鉴定.应用DNAstar等生物分析软件对该蛋白的理化特性、跨膜区域、二级结构、三维结构进行预测.结果：双酶切鉴定及测序分析表明,成功构建基因工程菌株高效表达质粒phoS2/pET32a.IPTG诱导表达SDS-PAGE鉴定结果显示,上清液中只见极少量的特异蛋白表达带,沉淀部分可见明显的特异表达带,说明phoS2主要以包涵体表达.经免疫印迹分析获得的phoS2分子量为37953u.生物信息学预测该蛋白分子质量为37953.1ku,理论等电点为5.75,具有1个跨膜区,位于1-19位,结构域位于1-370位.结论：成功构建结核分支杆菌phoS2/ pET32a重组质粒,phoS2能够高效表达.蛋白结构功能的预测对本实验的实施及选取进一步的研究提供了理论依据.
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