玉竹ISSR反应体系的优化

来源 :湖南中医药大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zlongtime
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目的建立稳定性高、重复性好的适合玉竹ISSR-PCR扩增的反应体系。方法以玉竹根茎为材料,采用改良的CTAB法提取玉竹基因组DNA,并利用单因素多水平试验,分别对模板DNA、引物、Mg^2+、Taq酶、dNTP的浓度和退火温度进行考察。结果玉竹的最佳反应体系为:在20μL的反应体系中,含1×buffer、15 ng模板DNA、0.4μmol/L引物、2 mmol/L Mg^2+、1.0 U Taq酶、200μmol/L dNTP。此反应体系以52℃的退火温度扩增出来的玉竹电泳图谱清晰,重复性好。
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