【摘 要】
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为研制鹿慢性消耗性疾病(chronic wasting disease,CWD)单克隆抗体,本研究以原核表达后经纯化的麋鹿重组成熟朊蛋白(PrPc)为免疫原免疫PrP基因敲除小鼠(PrPc-null mice).两次
【机 构】
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中国动物卫生与流行病学中心,青岛农业大学
【基金项目】
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国家公益性行业(农业)科研专项;
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为研制鹿慢性消耗性疾病(chronic wasting disease,CWD)单克隆抗体,本研究以原核表达后经纯化的麋鹿重组成熟朊蛋白(PrPc)为免疫原免疫PrP基因敲除小鼠(PrPc-null mice).两次加强免疫后,利用淋巴细胞杂交瘤技术,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,采用3次有限稀释法实现杂交瘤细胞的亚克隆,筛选出5株能稳定分泌针对麋鹿重组成熟朊蛋白特异性单克隆杭体(McAbs)的杂交瘤细胞株5A5、3B2、6D12、5E3、1F5,其腹水ELISA效价均达到1:10000以上.经鉴定,5株单抗均为IgG抗体,5A5、6D12、5E3株为IgG1亚类,3B2、1F5株为IgG2a亚类.Western blotting鉴定结果表明,获得的McAbs均能特异性识别糜鹿重组成熟朊蛋白和健康麋鹿脑组织匀浆中的PrPc.本研究制备了CWD腹水McAbs,同时也为CWD的研究及其诊断方法的建立奠定了基础.
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