伪狂犬病病毒鄂A株TK^—／gG^—／LacZ^＋突变株的构建

来源 :病毒学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：carefreebeet

【摘要】

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为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株，采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切，构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒pSTK1－4，进一步改造成为转移

【作者】

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陈焕春周复春方六荣何启盖吴斌洪文洲

【机构】

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华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒实验室

【出处】

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病毒学报

【发表日期】

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2001年1期

【关键词】

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伪狂犬病病毒鄂A野毒株 TK^-/LacZ^+突变株 TK缺失突变株 TK^-/gG^-/LacZ^+突变株 Pseudorabies virus Ea s

【基金项目】

：

国家科技攻关项目

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为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株，采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切，构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒pSTK1－4，进一步改造成为转移质粒pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化，然后与用EcoRI消化的伪狂犬病病毒鄂A株TK－／LacZ＋突变株基因组DNA共转染PK－15细胞，待完全病变后，收毒作空斑试验，PCR筛选TK缺失的重组病毒。重组病毒空斑纯化3次，随机挑取空斑进行PCR扩增，证实所获得的病毒为均一的无TK－／LacZ＋突变株污染的TK缺失的重

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