论文部分内容阅读
摘要：目的建立HPLC法测定胃炎颗粒中橙皮苷的含量。方法采用C18柱（250 mm×4.6mm，5μm）色谱柱；流动相为：甲醇-0.1% 磷酸水溶液（30-70）；流速1.0 mL/min；检测波长283nm。结果橙皮苷的线性范围为0.4536～3.024μg，r=0.9998，平均回收率为99.27%，RSD=1.18%。结论此方法简便、准确，可作为该制剂的质量控制方法。
关键词：胃炎颗粒；HPLC；橙皮苷
中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）12-0091-02
【Abstract】Objective：To establish a HPLC method for the determination of hesperidin in Gastritis Granules. Method：C18 chromatographic column（250mm×4.6mm 5μm）was used. The mobile phase was methano l-0.1% phosphoric acid（30-70），with 1.0 mL/min of flow rate，and 283 nm of detection wavelength. Results：The linear range of hesperidin was from 0.4536 to 3.024μg，r=0.9998. The average recovery rate was 99.27% and RSD was 1.18%. Conclusion：The method is simple and accurate and can be used as a quality control method for hesperidin.
【Key words】gastritis granules，HPLC，hesperidin
胃炎颗粒系临床经验方，由陈皮、党参、紫苏子、炒扁豆、枳壳等12味中药组成的复方制剂，具有温中散寒，和胃止呕的作用，临床上用于胃脘满闷，泛吐酸水等慢性胃炎病症。方中陈皮为主药，具有理气健脾、燥湿化痰的功效[1]，橙皮苷是陈皮的主要活性成分，橙皮苷能降低胆固醇，抑制试验性溃疡，降低毛细血管通透性，能增强纤维蛋白的溶解，抗血栓形成，具有调节肠胃功能以及利胆作用[2]。因此，为有效控制胃炎颗粒质量，确保该制剂的疗效与安全，本试验中以方中主药陈皮的有效成分橙皮苷作为指标成分，采用高效液相色谱（HPLC）法直接测定橙皮苷的含量，结果满意，专属性强、操作简便，现报到如下。
1仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪（四元泵，DAD检测器，自动进样器），Agilent1200化学工作站；BP211D型电子分析天平（德国Sartoius）。橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110721-200211）；胃炎颗粒（系自制）；水为超纯水，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2方法
2.1色谱条件色谱柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-1%磷酸水（22-78）；流速：1.0 mL/min；柱温：3 0℃；检测波长：283 nm；进样量10 μL。在此条件下，橙皮苷与其他色谱峰分离良好，理论板数以橙皮苷峰计算，应不低于3000。
2.2对照品溶液的制备精密称取橙皮苷7.56 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（0.1512 mg/mL）[3]。
2.3供试品溶液制备取本品适量，研细，取0.5 g，精密称定，加于具塞三角烧瓶中，精密加入25 mL甲醇，称定重量，冷浸2 h，超声处理30 min，取出，放至室温，称重，用甲醇补充减失的重量，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液[4]。
2.4阴性对照试验按处方取缺陈皮的阴性对照药，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液，进样，依法测定，结果阴性对照液在相同位置处无与橙皮苷相对应的色谱峰，表明处方中其它药材和辅料不干扰橙皮苷的测定。
2.5线性关系的考察分别精密吸取对照品溶液3，5，10，15，20 μL进样，以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，苦杏仁苷的回归方程为Y=895.6X+573，r=0.9998，表明进样量在0.4536～3.024 μg范围内呈良好的线性关系。
2.6精密度实验精密吸取上述对照品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续进样5次，测定橙皮苷峰面积值，计算木橙皮苷RSD为0.67%（n=5），表明仪器精密度良好。
2.7稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0，2，4，8，24 h测定橙皮苷峰面积，结果RSD为1.21%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.8重复性实验精密称取同一批次的样品6份，按照供试品溶液制备方法得到供试品溶液，依上述色谱条件测定橙皮苷的含量，其RSD为1.56%，表明本方法重复性良好。
2.9加样回收率实验采用加样回收法测定，取已知含量的样品（批号：141109）研細，取约1.0 g，精密称定，精密加入橙皮苷对照品适量，制成各自的供试品溶液，依法测定，计算加样回收率。结果见表1。
2.10样品测定取3批样品，各取1 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，10μL进样。结果见表2。
3讨论
陈皮药材中橙皮苷的法定测定方法是用石油醚回流提取，然后再加甲醇回流提取，以甲醇-醋酸-水为流动相[5]，为了尽可能避免溶剂峰对实验的干扰，本试验中采用的流动相是甲醇-1%磷酸水（22-78），曾比较多种流动相，以甲醇-1%磷酸水（20-80）作为流动相，可使橙皮苷峰达到较好分离，峰形也较好，理论板数高，故选其作为流动相。对于测定波长的选定，笔者通过用紫外分光光度计进行扫描，对照品和供试品的甲醇溶液均在283 nm波长处有最大吸收，故选择283 nm为检测波长[6]。试验中采用曾考察了甲醇回流提取30 min，甲醇回流提取40 min，甲醇回流提取1 h，甲醇冷浸 1 h，甲醇冷浸2 h，甲醇冷浸2.5 h，甲醇、50%甲醇、乙醇等提取溶剂，结果表明，冷浸2 h，甲醇提取效果与甲醇回流提取30 min，效果相当，为了节省资源，简单方便，选择甲醇冷浸2 h，同时对超声提取时间做了比较，分别超声处理 10，15，20，30，40 min，结果表明，随超声时间延长，含量也相应增加，但 30 min后含量不再增加，故选择超声提取 30 min。
参考文献：
[1]曹铭希.陈皮中橙皮苷的提取及其药理活性的研究进展[J].中国医药指南，2012，10（12）：452-454.
[2]王春燕.浅谈陈皮的药理作用及临床应用[J].中国中医药现代远程教育，2013，11（3）：120-121.
[3]陈少萍，童冰妮，钟金妮.RP-HPLC测定和中理脾丸中橙皮苷含量[J].中国中医药信息杂志，2015，22（1）：80-82.
[4]宋岚，邝明，陈菊.香砂参术颗粒中橙皮苷的含量测定[J].药物与人，2015，28（2）：28-29.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010，177.
[6]谭丽荷.陈皮四物片中橙皮苷的含量测定[J].中国当代医药，2015，2（9）：88-90.
（收稿日期：2016-07-18）
关键词：胃炎颗粒；HPLC；橙皮苷
中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）12-0091-02
【Abstract】Objective：To establish a HPLC method for the determination of hesperidin in Gastritis Granules. Method：C18 chromatographic column（250mm×4.6mm 5μm）was used. The mobile phase was methano l-0.1% phosphoric acid（30-70），with 1.0 mL/min of flow rate，and 283 nm of detection wavelength. Results：The linear range of hesperidin was from 0.4536 to 3.024μg，r=0.9998. The average recovery rate was 99.27% and RSD was 1.18%. Conclusion：The method is simple and accurate and can be used as a quality control method for hesperidin.
【Key words】gastritis granules，HPLC，hesperidin
胃炎颗粒系临床经验方，由陈皮、党参、紫苏子、炒扁豆、枳壳等12味中药组成的复方制剂，具有温中散寒，和胃止呕的作用，临床上用于胃脘满闷，泛吐酸水等慢性胃炎病症。方中陈皮为主药，具有理气健脾、燥湿化痰的功效[1]，橙皮苷是陈皮的主要活性成分，橙皮苷能降低胆固醇，抑制试验性溃疡，降低毛细血管通透性，能增强纤维蛋白的溶解，抗血栓形成，具有调节肠胃功能以及利胆作用[2]。因此，为有效控制胃炎颗粒质量，确保该制剂的疗效与安全，本试验中以方中主药陈皮的有效成分橙皮苷作为指标成分，采用高效液相色谱（HPLC）法直接测定橙皮苷的含量，结果满意，专属性强、操作简便，现报到如下。
1仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪（四元泵，DAD检测器，自动进样器），Agilent1200化学工作站；BP211D型电子分析天平（德国Sartoius）。橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110721-200211）；胃炎颗粒（系自制）；水为超纯水，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2方法
2.1色谱条件色谱柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-1%磷酸水（22-78）；流速：1.0 mL/min；柱温：3 0℃；检测波长：283 nm；进样量10 μL。在此条件下，橙皮苷与其他色谱峰分离良好，理论板数以橙皮苷峰计算，应不低于3000。
2.2对照品溶液的制备精密称取橙皮苷7.56 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（0.1512 mg/mL）[3]。
2.3供试品溶液制备取本品适量，研细，取0.5 g，精密称定，加于具塞三角烧瓶中，精密加入25 mL甲醇，称定重量，冷浸2 h，超声处理30 min，取出，放至室温，称重，用甲醇补充减失的重量，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液[4]。
2.4阴性对照试验按处方取缺陈皮的阴性对照药，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液，进样，依法测定，结果阴性对照液在相同位置处无与橙皮苷相对应的色谱峰，表明处方中其它药材和辅料不干扰橙皮苷的测定。
2.5线性关系的考察分别精密吸取对照品溶液3，5，10，15，20 μL进样，以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，苦杏仁苷的回归方程为Y=895.6X+573，r=0.9998，表明进样量在0.4536～3.024 μg范围内呈良好的线性关系。
2.6精密度实验精密吸取上述对照品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续进样5次，测定橙皮苷峰面积值，计算木橙皮苷RSD为0.67%（n=5），表明仪器精密度良好。
2.7稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0，2，4，8，24 h测定橙皮苷峰面积，结果RSD为1.21%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.8重复性实验精密称取同一批次的样品6份，按照供试品溶液制备方法得到供试品溶液，依上述色谱条件测定橙皮苷的含量，其RSD为1.56%，表明本方法重复性良好。
2.9加样回收率实验采用加样回收法测定，取已知含量的样品（批号：141109）研細，取约1.0 g，精密称定，精密加入橙皮苷对照品适量，制成各自的供试品溶液，依法测定，计算加样回收率。结果见表1。
2.10样品测定取3批样品，各取1 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，10μL进样。结果见表2。
3讨论
陈皮药材中橙皮苷的法定测定方法是用石油醚回流提取，然后再加甲醇回流提取，以甲醇-醋酸-水为流动相[5]，为了尽可能避免溶剂峰对实验的干扰，本试验中采用的流动相是甲醇-1%磷酸水（22-78），曾比较多种流动相，以甲醇-1%磷酸水（20-80）作为流动相，可使橙皮苷峰达到较好分离，峰形也较好，理论板数高，故选其作为流动相。对于测定波长的选定，笔者通过用紫外分光光度计进行扫描，对照品和供试品的甲醇溶液均在283 nm波长处有最大吸收，故选择283 nm为检测波长[6]。试验中采用曾考察了甲醇回流提取30 min，甲醇回流提取40 min，甲醇回流提取1 h，甲醇冷浸 1 h，甲醇冷浸2 h，甲醇冷浸2.5 h，甲醇、50%甲醇、乙醇等提取溶剂，结果表明，冷浸2 h，甲醇提取效果与甲醇回流提取30 min，效果相当，为了节省资源，简单方便，选择甲醇冷浸2 h，同时对超声提取时间做了比较，分别超声处理 10，15，20，30，40 min，结果表明，随超声时间延长，含量也相应增加，但 30 min后含量不再增加，故选择超声提取 30 min。
参考文献：
[1]曹铭希.陈皮中橙皮苷的提取及其药理活性的研究进展[J].中国医药指南，2012，10（12）：452-454.
[2]王春燕.浅谈陈皮的药理作用及临床应用[J].中国中医药现代远程教育，2013，11（3）：120-121.
[3]陈少萍，童冰妮，钟金妮.RP-HPLC测定和中理脾丸中橙皮苷含量[J].中国中医药信息杂志，2015，22（1）：80-82.
[4]宋岚，邝明，陈菊.香砂参术颗粒中橙皮苷的含量测定[J].药物与人，2015，28（2）：28-29.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010，177.
[6]谭丽荷.陈皮四物片中橙皮苷的含量测定[J].中国当代医药，2015，2（9）：88-90.
（收稿日期：2016-07-18）