【摘 要】
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通常研究人员按照RNA分子翻译蛋白的能力将其划分为信使RNA(Message RNA,mRNA)及非编码 RNA(Non-coding RNA,ncRNA).非编码 RNA 根据长度分为两类:长非编码RNA(即长度超过200 bp的1ncRNA)和短RNA(长度小于50bp).短RNA又包括:干扰小RNA(siRNA)和微RNA(miRNA)等.miRNA是一类由内源基因编码的长度约为18～36个核苷酸的非编码单链RNA分子,通过与靶标mRNA的3\'端非翻译区(3\'-untranslated
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通常研究人员按照RNA分子翻译蛋白的能力将其划分为信使RNA(Message RNA,mRNA)及非编码 RNA(Non-coding RNA,ncRNA).非编码 RNA 根据长度分为两类:长非编码RNA(即长度超过200 bp的1ncRNA)和短RNA(长度小于50bp).短RNA又包括:干扰小RNA(siRNA)和微RNA(miRNA)等.miRNA是一类由内源基因编码的长度约为18～36个核苷酸的非编码单链RNA分子,通过与靶标mRNA的3\'端非翻译区(3\'-untranslated region,3\'-UTR)特异性结合,从而引起靶标mRNA分子的降解或翻译抑制,在动植物中参与转录后基因表达调控.越来越多的研究表明,miRNA在病毒感染和免疫调节中起着重要作用.
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为了研究锡兰钩虫鞘脂激活蛋白样蛋白(Ace-SLP-1)的免疫学特性,本研究以锡兰钩虫成虫cDNA为模板,根据GenBank中Ace-SLP-1基因序列(DQ855414.1)设计特异性引物,采用RT-PCR扩增Ace-SLP-1基因,结果显示,PCR扩增了Ace-SLP-1基因,其ORF全长315bp,编码104个氨基酸;利用在线软件对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果显示该蛋白为疏水蛋白,前17个氨基酸为信号肽序列且有跨膜结构域等;根据Ace-SLP-1基因编码氨基酸序列信息将其成熟肽编码
为筛选表达量高且免疫原性强的红斑丹毒丝菌表面保护性抗原A(SpaA)的抗原片段,本研究根据该菌SpaA的结构和功能区将其设计为6个子片段和1个全长片段,采用PCR技术从红斑丹毒丝菌HG-1菌株中扩增出SpaA的7个抗原基因片段,利用原核表达系统克隆并表达后采用SDS-PAGE和western blot检测表达及纯化情况.结果显示,获得7个重组蛋白,分别命名为rSpaA1～rSpaA7,其表达量占菌体总蛋白的17.44％～25.38％,其中rSpaA1、rSpaA2、rSpaA5以包涵体形式表达,rSpaA
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为获得肠炎沙门氏菌SEF14菌毛蛋白并检测其生物学功能,本研究以肠炎沙门氏菌标准株SE50336为模板,PCR扩增其含分泌信号肽的sef14操纵子基因片段,并克隆至表达载体pBR322中,构建重组质粒pBR322-sef14,将该重组质粒转化至经修饰且不含任何菌毛的大肠杆菌SE5000M株中,获得重组菌pBR322-sef14/SE5000M.将重组菌pBR322-sef14/SE5000M与本实验室制备的SefA(SEF14菌毛的主要亚基)单克隆抗体(MAb)凝集;利用透射电镜和免疫电镜观察上述重组菌并
原癌基因c-myc被鉴定为J亚群禽白血病病毒(ALV-J)诱导髓样细胞瘤的常见整合位点,其异常激活可能是ALV-J最重要的分子致病机制.为了鉴定c-myc反义RNA对c-myc基因表达的影响及其在ALV-J增殖中的作用,本研究通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术、PCR扩增5\'-race和3\'-race后对其编码属性的分析鉴定结果显示,鸡c-myc原癌基因反义RNA全长621 bp,且不编码蛋白;该反义RNA序列定位于鸡2号染色体,且源自c-myc外显子3反向序列,因此将其命名为ch-MY
Rev蛋白是所有慢病毒属成员均具有的附属蛋白,它与病毒mRNA的特定序列结合,将编码病毒结构蛋白的mRNA运输至胞浆,从而促进病毒结构蛋白的表达,将Rev介导病毒mRNA核质运输的生物学功能简称为核输出活性.为建立马传染性贫血病毒(EIAV)附属蛋白Rev的核输出活性检测方法,本研究通过PCR方法克隆了EIAV的结构蛋白Gag-Pol编码区序列及Rev反应元件(RRE)序列,构建pGagpol-RRE表达载体,将其单独或与Rev表达载体(pcDNA-RevFDDV-HA)共转染HEK293T细胞后,通过w
为探究旋毛虫肌幼虫中是否存在谷氨酰胺依赖性抗酸机制(AR4),本研究根据GenBank中旋毛虫肌幼虫谷氨酰胺酶(TsGLS)基因序列设计3条特异性siRNA分子,并通过浸泡法分别导入旋毛虫肌幼虫体内,利用荧光定量PCR(qPCR)、western blot以及间接免疫荧光试验(IFA),筛选沉默效果最佳的siRNA分子,并确定其最佳转染条件,结果显示,siRNA-881为基因沉默最佳的siRNA分子,且转染12 h、2μmol/L浓度、培养3d为最佳基因沉默条件.在不同的酸性条件下培养并检测转染siRNA
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