【摘 要】
：
本文利用原核系统表达海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin,并纯化和鉴定其活性.首先PCR法从模板分别扩增SUMO以及Harobin基因,再重叠PCR方法获得SUMO-Harobin融合基因,经NdeI、BamHI双
【机 构】
：
暨南大学生物医药研究院/细胞生物学系,暨南大学生物工程药物广东省重点实验室,基因工程药物国家工程研究中心,广东广州510632;暨南大学生物工程学系,广东广州510632;暨南大学生物工程学系,广东广
论文部分内容阅读
本文利用原核系统表达海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin,并纯化和鉴定其活性.首先PCR法从模板分别扩增SUMO以及Harobin基因,再重叠PCR方法获得SUMO-Harobin融合基因,经NdeI、BamHI双酶切后,连入pET3C质粒,构建pET3 C-SUMO/Harobin重组质粒.重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导菌体表达,收集菌体分析发现大部分目的蛋白为包涵体.将获得的包涵体经尿素变性,用Ni-NTA亲和层析后,梯度透析复性融合蛋白.复性好的蛋白用Benzamidin Sepharose亲和层析纯化,得到高纯度的融合蛋白.进一步采用降解纤维蛋白原法测定融合蛋白活性.结果成功构建了pET3C-SUMO/Harobin重组载体,融合蛋白Harobin在原核系统中是以包涵体的形式存在.融合蛋白经过变性复性,并结合两步纯化法获得了90％纯度的融合蛋白；经过测定纤维蛋白原降解能力,显示融合蛋白具有降解纤维蛋白原的活性.
其他文献
为了能够较好的落实我国的教育方针,形成终身体育的锻炼思想,促进学生体育锻炼习惯的形成,为此,对学生体育锻炼习惯形成的影响因素进行了研究.从学生自身、教师教学和教学内
近年来无痛人流技术已逐渐应用于临床,我院用丙泊酚联合芬太尼静脉麻醉取得良好的效果。现报告如下。1资料与方法1.1一般资料我院于2005年1月~2006年1月应用静脉镇痛给药的人
This study presents an eye-safe, single-mode, nanosecond-pulsed, and all-fiber laser source with master- oscillator-power-amplifier configuration at 1 550 nm th
Gene function analysis is challenging for Lilium due to the lack of an efficient method for stable genetic transformation. Virus-induced gene silencing (VIGS) i
目前,高校的公共体育教学中程式化的教学形式较多,而大多数教学内容和教学过程忽视对学生心理健康的关注,缺乏对学生的人文关怀和对教学环境的关注,把定向越野运动课程引入到
研究黄精多糖(PP)对环磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。将40只小鼠随机分为5组:正常、模型、PP低、中、高(100,400,800 mg/kg)剂量组。每日灌胃给药饲养20 d,
我国教育部提出要建立健全各学段学生发展核心素养体系,作为素质教育的重要构成部分,中学体育教学担负着中学生德、智、体、美全面发展的人物.本文主要探讨了通过中学体育教
古训讲求以“劳而不倦”为保健养生之道,“莫要久行、久立、久坐、久视、久卧”。其实,这五种动作是人们在日常生活中经常要做的,也是最容易被忽视的对健康有害的动作。
The
随着新课程改革教育事业的铺开,小学体育课程也呈现出了新的发展趋势.如何借助于多元化的教学策略,提高体育教学的课堂质量,成为摆在广大教育工作面前的重要任务.本文针对在
为获取提取马勃总生物碱的最优方法,比较了酸性醇回流法和一般醇回流法提取马勃总生物碱的效果,并结合使用正交设计和响应面法两种实验设计方法,研究酸性醇回流法提取脱皮马