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建立原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血CD4+T细胞受体(TCR)Vβ链的CDR3免疫组库,分析其多样性的改变及TCR Vβ链CDR3序列的优势取用情况。
方法利用扩增子救援多重PCR(Arm-PCR)技术和高通量测序技术半定量扩增并测序得到CD4+T细胞TCR Vβ链的CDR3序列,并结合临床资料对测序结果进行生物信息学分析。两组间均数比较用非参数检验。
结果成功建立了7例PBC患者外周血CD4+T细胞TCR Vβ链CDR3免疫组库;PBC患者组CDR3序列多样性为11.3±2.9(D50值,
±s,n = 7)低于健康志愿者组的18.1±0.6(D50值,n = 10)(P < 0.05),且晚期PBC患者CDR3序列多样性(4.5±2.9)较早期患者CDR3序列多样性(16.7±2.8)降低(P < 0.05);7例PBC患者外周血CD4+T细胞均共有的TCR Vβ链CDR3优势取用序列多达52种,通过与健康志愿组进行比较,初步筛选出4种优势取用氨基酸序列"ASSFTGGPVEQY""ASSLISSGNNEQF""ATSRDTLAGGPGDTQY""SASLEGNTEAF",且4种PBC优势取用序列在晚期PBC患者中出现的频次较早期显著增加。
本研究通过7例PBC患者外周血CD4+T细胞TCR Vβ链CDR3免疫组库的建立及多样性和疾病优势取用序列的分析,提示特征性(具有特定TCR VβCDR3序列)的CD4+T细胞大量克隆扩增可能是该疾病发生及进展的重要因素,为临床免疫治疗提供了重要的理论基础和分子靶点。