【摘 要】
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根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆SW分离株E2基因进行RT PCR扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入华赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组
【机 构】
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石河子大学,动物遗传改良与疾病控制新疆自治区重点实验室,新疆石河子832003石河子大学,动物遗传改良与疾病控制新疆自治区重点实验室,新疆石河子832003;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原
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根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆SW分离株E2基因进行RT PCR扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入华赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-E2.用Sal Ⅰ酶切线性化重组质粒pPIC9K-E2,电转化酵母GS115,通过G418筛选重组酵母菌GS115-pPIC9K-E2,用ψ=1.5％甲醇诱导,SDS PAGE和Western blot分析表达产物.SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白分子质量为23.2 ku;Western blot分析表明,该重组蛋白可与BVDV-2多克隆抗体发生特异性血清学反应,证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性.
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