【摘 要】
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目的：将兔出血症病毒(RHDV)VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,验证重组蛋白形成病毒样颗粒(VLPs)的能力及其生物学特性,探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力.方法：用Bac-to-Bac系统体外表达RHDV VP60全长基因.以免疫荧光及Western blotting检测蛋白表达情况及确定蛋白最佳表达条件；免疫电镜观察VLPs形态,并对VLPs的血凝性、免疫原性进行检测
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部实验动物质量监督检验测试中心,哈尔滨,150001 中国农业
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目的：将兔出血症病毒(RHDV)VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,验证重组蛋白形成病毒样颗粒(VLPs)的能力及其生物学特性,探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力.
方法：用Bac-to-Bac系统体外表达RHDV VP60全长基因.以免疫荧光及Western blotting检测蛋白表达情况及确定蛋白最佳表达条件；免疫电镜观察VLPs形态,并对VLPs的血凝性、免疫原性进行检测.
结果： SDS-PAGE电泳分析表明,表达的重组蛋白分子量大小约为68 KDa,在免疫荧光、琼脂扩散、ELISA试验中均与RHD多克隆抗血清特异性反应；接种重组病毒的Sf9细胞裂解液在电镜下可观察到与RHDV形态相似的VLPs；该VLPs可凝集人"O"、"B"型红细胞,凝集可被RHD多克隆抗血清所抑制；含VLPs的Sf9细胞裂解液可不经纯化用作间接ELISA抗原,所建立的ELISA方法与进口商品化试剂盒相比,特异性良好,敏感性、检出率稍低；将含VLPs的细胞裂解液加氟氏佐剂免疫兔,HI效价可达1∶40,可经受致死量病毒攻击.
结论： RHDV-VLPs的获得及其良好的免疫原性,为RHD血清学检测试剂的标准化、亚单位疫苗研制应用奠定基础,同时在转移载体及RHDV受体方面研究亦有潜在应用价值.
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