目的用反义寡核苷酸封闭肝癌细胞中survivin基因的表达,研究其诱导细胞凋亡的作用及其机制. 方法用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡比率,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝系统变化,激酶活性检测方法测定细胞内caspase-3活性变化,免疫沉淀法测定细胞内丝裂原活化蛋白激酶p38 (p38MAPK)活性的变化. 结果脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染肝癌细胞后Ⅰ～Ⅵ组(空白对照、正义对照、400、600、800、1000ng/ml反义转染组)细胞内p38MAPK活性分别为7.03、7.07、13.47、16.37、43.97及47.87;caspase-3活性分别为0.015±0.010、0.014±0.002、0.026±0.003、0.042±0.001、0.093±0.001及0.100±0.001;Ⅳ～Ⅵ组细胞内p38MAPK及caspase-3活性较对照组明显升高.转染后细胞发生G2/M期阻滞,Ⅰ～Ⅵ组细胞凋亡率分别为0.70%、0.76%、2.43%、7.82%、23.11%及31.35%,各实验组细胞凋亡较对照组明显增加.细胞内微丝形态结构破坏,Ⅰ～Ⅵ组细胞肌动蛋白平均荧光强度分别为189.69±6.68、184.23±8.76、173.14±8.15、99.48±6.57、76.69±10.05及63.80±6.79,Ⅳ～Ⅵ组细胞肌动蛋白平均荧光强度较对照组明显降低. 结论脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸可以诱导细胞发生G2/M期阻滞;同时通过激活p38MAPK 诱导caspase-3活化,活化的caspase-3切割破坏细胞内骨架微丝系统的结构,进而诱导细胞发生凋亡.
Survivin反义寡核苷酸诱导肝癌细胞凋亡的作用
【摘 要】
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目的用反义寡核苷酸封闭肝癌细胞中survivin基因的表达,研究其诱导细胞凋亡的作用及其机制. 方法用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡比率,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝系统变化,激酶活性检测方法测定细胞内caspase-3活性变化,免疫沉淀法测定细胞内丝裂原活化蛋白激酶p38 (p38MAPK)活性的变化. 结果
【机 构】
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610083,成都,成都军区总医院全军普通外科中心,
【出 处】
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中华肝脏病杂志
【发表日期】
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2003年11期
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