【摘 要】
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目的 研究冬凌草甲素(Oridonin)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症反应中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)的作用.方法 将Raw264.7巨噬细胞分成空白组、对照组、实验组(
【机 构】
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中山大学附属第一医院心外科,广东广州510080
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目的 研究冬凌草甲素(Oridonin)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症反应中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)的作用.方法 将Raw264.7巨噬细胞分成空白组、对照组、实验组(终浓度分别为4、10、15、20μmol/L Oridonin组),采用CCK8法检测细胞存活率,筛选Oridonin药物浓度.将小鼠Raw264.7巨噬细胞分为正常对照组、LPS组和LPS+Oridonin组,采用RT-qPCR法检测NLRP3、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、半胱氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)和白介素-1β(IL-1β)mRNA的表达;Western blot法检测NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达;免疫荧光染色检测NLRP3和Caspase-1蛋白共定位.结果 Oridonin浓度为20卜μmol/L细胞存活率急剧减少,浓度在4～15 μmol/L之间细胞存活率较高,实验选用10 μmol/L Oridonin处理小鼠巨噬细胞.与正常对照组比较,LPS组NLRP3、TNF-α、IL-6、Caspase-l和IL-1β mRNA基因表达显著上调(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+Oridonin组NLRP3、TNF-α、IL-6、Caspase-1和IL-1β mRNA基因表达明显减少(P＜0.05).与正常对照组比较,LPS组NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达显著增多(P＜0.05),与LPS组比较,LPS+Oridonin组巨噬细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达明显减少(P＜0.05).与正常对照组比较,LPS组NLRP3和Caspase-1蛋白共定位明显增多,LPS+Oridonin组蛋白共定位明显减少.结论 Oridonin通过抑制NLRP3途径减轻LPS诱导的巨噬细胞炎症反应.
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