离体角质形成细胞热损伤模型建立及细胞凋亡观察

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目的建立离体KC热损伤模型,了解不同温度热损伤后KC凋亡情况。方法体外培养人KC,分别以37、41、43、45、48、51℃孵育KC10min。用锥虫蓝染色初步观察KC死亡情况,Hoeehst33258荧光染色检测细胞凋亡情况,应用流式细胞仪对细胞凋亡和死亡情况进行定量分析。采用噻唑蓝法检测热损伤对KC增殖活性的影响。结果锥虫蓝染色、Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪检测结果显示,随着热损伤温度的升高,KC中凋亡和死亡细胞逐渐增加;45oC时KC凋亡率和死亡率分别为(12.3±3.2)%、(14.1±1.6)%,48℃时各为(27.7±5.1)%、(58.0±4.2)%,51℃时KC死亡率高达(83.0±5.3)%。噻唑蓝法检测结果显示,45℃热损伤条件下KC生长出现平台期。结论热损伤能造成离体KC凋亡、生长受抑制,45℃孵育10min为构建KC热损伤模型的较好条件。该模型可用于研究KC热损伤后的凋亡情况及其生物学特性。

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