【摘 要】
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目的 研究重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体对原代培养的神经于细胞(neural stem cells,NSC)的体外转染及其对细胞增殖、分化和迁移能力的影响.
【机 构】
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哈尔滨医科大学第一附属医院神经外科,哈尔滨医科大学基础医学院微生物教研室
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目的 研究重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体对原代培养的神经于细胞(neural stem cells,NSC)的体外转染及其对细胞增殖、分化和迁移能力的影响.方法 取新生24 h内的Wistar大鼠的海马进行神经干细胞原代培养,用不同滴度的rAAV为载体,以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因作为报告基因进行体外转染NSC,通过观察有绿色荧光的Nsc的数量,测定rAAV对NSC的体外转染情况;用MTT法测定不同病毒滴度下rAAV对NSC增殖能力的影响,用免疫组化法鉴定NSC、神经元及神经胶质细胞,并在倒置荧光显微镜下直接测定细胞的迁移距离.结果 rAAV对NSC的体外转染效率随着病毒滴度的增加而提高,在转染后的第11天表达水平最高,用MOI为104、105、106的rAAV转染后第11天的转导率分别是9.81%、56.30%、64.67%;不同滴度rAAV转染NSC后不同时间点的MTT测定A值随着病毒滴度的增加而明显减小,差异均有统计学意义;但不同滴度rAAV转染NSC,其分化为神经元和神经胶质细胞的比率以及迁移的距离未见差异.结论 较高滴度(MOI为105和106)的rAAV可以在体外有效地转染神经干细胞,且不影响神经干细胞的分化和迁移能力,但对其增殖能力有明显抑制,并表现为病毒滴度依赖性.
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