【摘 要】
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目的 建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法.方法 选择6只SPF级BALB/c小鼠,模型组经尾静脉注射脂多糖(LPS)25 mg/kg,使平均动脉压(MAP)降至40 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)造成内
【基金项目】
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广东省科技计划;国家重点基础研究发展计划(973计划);国家自然科学基金
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目的 建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法.方法 选择6只SPF级BALB/c小鼠,模型组经尾静脉注射脂多糖(LPS)25 mg/kg,使平均动脉压(MAP)降至40 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)造成内毒素休克,然后迅速处死,正常对照组同期处死,取肝脏组织.利用生物素-链亲和素系统结合磁珠分离技术筛选内毒素诱导基因(LIG)启动子的结合蛋白.用聚合酶链反应(PCR)扩增末端带生物素标记的LIG启动子探针,提取动物肝脏组织胞核蛋白,与制备的LIG启动子探针进行孵育,再以标记有链亲和素的磁珠分离LIG启动子-蛋白反应复合物,使用不同浓度NaCl洗脱结合的蛋白,使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离样品蛋白,并对凝胶进行银染显色,比较模型组与正常对照组的差异条带.结果 两组胞核蛋白中共观察到15条差异条带.分析差异条带显示,与正常对照组比较,在低亲和力作用水平,LPS作用后有4个蛋白开始与LIG启动子作用力增强,而有1个蛋白则同启动子的相互作用减弱;在DNA-蛋白质高亲和力作用水平,则有9个蛋白因LPS刺激而同DNA的结合力增强,有1个蛋白同启动子的相互作用消失.结论 成功建立了生物素-链亲和素结合磁珠分离技术的新方法,为研究DNA-蛋白质相互作用开拓了新思路,并从"转录调控组学"角度深入理解基因表达调控机制奠定了基础.
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