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【摘要】目的观察黄芪对脊髓损伤后脂质过氧化的抑制作用，探讨黄芪对大鼠脊髓损伤的影响。方法96只大鼠随机分为对照组、实验组，Allen’s法制作脊髓损伤模型。分别于30m、1h和4h经腹腔内给药（对照组为盐水，实验组为盐水加黄芪注射液），1h、4h和8h 3个时间点处死大鼠，取出伤段脊髓。应用黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸化学发光法测定伤段脊中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。数据应用单因素方差分析（0ne-Way ANOVA）进行统计学处理。光镜观察损伤脊髓的组织病理学改变。结果对照组伤段脊髓脊髓内丙二醛的浓度不断升高，超氧化物歧化酶活性急剧下降，实验组大鼠脊髓内丙二醛浓度降低，超氧化物歧化酶活性升高。实验组与对照组之间在伤后各时相点的丙二醛浓度和超氧化物歧化酶活性均存在显著性差异。组织形态学观察：实验组各时间点损伤脊髓的组织病理切片显示出血、水肿、神经细胞变性较轻。结论黄芪可以抑制脊髓损伤后的脂质过氧化反应，减轻脊髓继发性损害。
【关键词】黄芪丙二醛超氧化物歧化酶脊髓损伤
1资料与方法
1.1实验动物：选用纯种SD大鼠96只，雌雄不限，体重300±50g.
1.2动物模型制备：2％戊巴比妥钠30mg/kg，腹腔内麻醉。俯卧位固定，后正中纵切口，剥离椎旁肌，显露胸椎，用微型咬骨钳咬除整个T10及T9下半部的棘突和椎板，显露脊髓硬脊膜。按Allen’s法，固定T8和T11棘突，使用脊髓打击器，选重锤10g，自10cm高处垂直落下，以T10为中心打击脊髓，造成大鼠脊髓中度挫伤模型。如果大鼠出现摆尾反射，则提示模型成功。
1.3动物分组及给药：将96只大鼠随即分成对照组和实验组，每组48只大鼠。各组大鼠分别于30m、1h和4h经腹腔内给药，见下表：单位ml/kg
黄芪注射液含量2mg/ml，四川成都地奥九泓制药厂生产
1.4实验指标检测：1h、4h和8h 3个时间点处死大鼠。每组每个时间点是16只大鼠。切除整个脊柱，取出伤段脊髓。
1）匀浆制备：每组取12只大鼠处死，取1cm脊髓组织，冰盐水中漂洗，洗净表面的血迹，滤纸吸干表面的液体，称组织湿重。用0.86%生理盐水按1:9（重量g/体积v）在冰浴下用微型匀浆器制成10%的组织匀浆。将匀浆以4000r/min离心10~15分钟，取上清夜测定。，应用黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸化学发光法（试剂盒购自南京建成生物工程研究所），测定脊髓组织中超氧化物歧化酶活性的测定和丙二醛含量。各数据用单因素方差分析（0ne-Way ANOVA）进行统计学处理。2）组织学观察：各组各时间点分别取4只大鼠，取伤段脊髓用10%甲醛固定，制备光镜切片标本，行HE染色，观察组织出血、坏死及神经细胞变性坏死等变化。
2实验结果
2.1生化指标：
2.1.1丙二醛含量（nmol/g）:实验组各时间点低于对照组，差异显著（p<0.01）.
2.1.2超氧化物歧化酶活力（u/g）:在实验组各时间点均高于对照组(p<0.01)。
2.2组织病理学改变：光镜：对照组伤后1小时灰质中央管有破裂，小血管周围灶性出血，神经元肿胀。4小时出血加重，神经元肿胀明显，尼氏体变浅，中央管周围灰质有变性，白质区间质有出血水肿。8小时，神经细胞变性，核固缩、溶解，可见吞噬现象。白质水肿明显。实验组各时间点出血、水肿、神经细胞变性较轻。
3讨论
脊髓损伤后，继发性的病理改变将加重脊髓损伤，甚至造成脊髓的不可逆伤害。由于血液供应减少，氧供应也减少，使细胞内线粒体的氧化磷酸化过程减慢，细胞因得不到充足的能量和氧供而使代谢活动降低，进而引起脊髓坏死和神经功能丧失；自由基和Ca++也是引起脊髓继发性损伤的重要因素。由于脊髓神经细胞膜上含有较多的磷脂和不饱和脂肪酸，自由基的大量产生不但破坏膜结构，而且影响磷脂膜上的重要酶系统如钠泵、钙泵等，导致继发性损伤不断加重[1]。黄芪能抑制黄嘌呤氧化酶活性、提高超氧化物歧化酶和过氧化酶活力，从而清除自由基、减轻组织损伤 [2] [3] 。陈鑫等[4]在大鼠创伤性脑外伤模型中，通过测定脑外伤后脑组织线粒体超氧化物歧化酶和丙二醛水平的变化，发现黄芪可通过影响线粒体功能来抑制脑外伤后的脂质过氧化，减轻创伤性脑损伤的继发性脑损害，从而改善预后。
本实验结果显示，实验组脊髓损伤后给予黄芪注射液腹腔注射后脊髓组织中丙二醛浓度明显低于各时相点对照组，超氧化物歧化酶活性显著升高。光镜下组织病理学检查发现实验组经过黄芪处理后脊髓组织各时间点出血、水肿、神经细胞变性较轻。上述结果表明，黄芪可明显抑制脊髓损伤后的脂质过氧化损伤,减轻脊髓继发性损害。
参考文献
［1］ 杨立利等.脊髓损伤患者的免疫功能变化及意义。临床骨科杂志，2001,4（4）：316-318。
［2］裴林，刘唤荣，张少丹，等.黄芪对缺氧缺血性脑损伤幼鼠一氧化氮、丙二醛含量的影响:中国中西医结合急救杂志，2001,4（8）：222-4
［3］金若敏，张晓晨，陈长勋，等.黄芪毛状根药理作用的研究:中国中药杂志,1999,24(10):619-21
［4］陈鑫，朱志安，马延斌，等.黄芪对脑外伤后脑组织线粒体超氧化物歧化酶和丙二醛水平影响的实验研究: 创伤外科杂志，2000,2(4):204-6
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【关键词】黄芪丙二醛超氧化物歧化酶脊髓损伤
1资料与方法
1.1实验动物：选用纯种SD大鼠96只，雌雄不限，体重300±50g.
1.2动物模型制备：2％戊巴比妥钠30mg/kg，腹腔内麻醉。俯卧位固定，后正中纵切口，剥离椎旁肌，显露胸椎，用微型咬骨钳咬除整个T10及T9下半部的棘突和椎板，显露脊髓硬脊膜。按Allen’s法，固定T8和T11棘突，使用脊髓打击器，选重锤10g，自10cm高处垂直落下，以T10为中心打击脊髓，造成大鼠脊髓中度挫伤模型。如果大鼠出现摆尾反射，则提示模型成功。
1.3动物分组及给药：将96只大鼠随即分成对照组和实验组，每组48只大鼠。各组大鼠分别于30m、1h和4h经腹腔内给药，见下表：单位ml/kg
黄芪注射液含量2mg/ml，四川成都地奥九泓制药厂生产
1.4实验指标检测：1h、4h和8h 3个时间点处死大鼠。每组每个时间点是16只大鼠。切除整个脊柱，取出伤段脊髓。
1）匀浆制备：每组取12只大鼠处死，取1cm脊髓组织，冰盐水中漂洗，洗净表面的血迹，滤纸吸干表面的液体，称组织湿重。用0.86%生理盐水按1:9（重量g/体积v）在冰浴下用微型匀浆器制成10%的组织匀浆。将匀浆以4000r/min离心10~15分钟，取上清夜测定。，应用黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸化学发光法（试剂盒购自南京建成生物工程研究所），测定脊髓组织中超氧化物歧化酶活性的测定和丙二醛含量。各数据用单因素方差分析（0ne-Way ANOVA）进行统计学处理。2）组织学观察：各组各时间点分别取4只大鼠，取伤段脊髓用10%甲醛固定，制备光镜切片标本，行HE染色，观察组织出血、坏死及神经细胞变性坏死等变化。
2实验结果
2.1生化指标：
2.1.1丙二醛含量（nmol/g）:实验组各时间点低于对照组，差异显著（p<0.01）.
2.1.2超氧化物歧化酶活力（u/g）:在实验组各时间点均高于对照组(p<0.01)。
2.2组织病理学改变：光镜：对照组伤后1小时灰质中央管有破裂，小血管周围灶性出血，神经元肿胀。4小时出血加重，神经元肿胀明显，尼氏体变浅，中央管周围灰质有变性，白质区间质有出血水肿。8小时，神经细胞变性，核固缩、溶解，可见吞噬现象。白质水肿明显。实验组各时间点出血、水肿、神经细胞变性较轻。
3讨论
脊髓损伤后，继发性的病理改变将加重脊髓损伤，甚至造成脊髓的不可逆伤害。由于血液供应减少，氧供应也减少，使细胞内线粒体的氧化磷酸化过程减慢，细胞因得不到充足的能量和氧供而使代谢活动降低，进而引起脊髓坏死和神经功能丧失；自由基和Ca++也是引起脊髓继发性损伤的重要因素。由于脊髓神经细胞膜上含有较多的磷脂和不饱和脂肪酸，自由基的大量产生不但破坏膜结构，而且影响磷脂膜上的重要酶系统如钠泵、钙泵等，导致继发性损伤不断加重[1]。黄芪能抑制黄嘌呤氧化酶活性、提高超氧化物歧化酶和过氧化酶活力，从而清除自由基、减轻组织损伤 [2] [3] 。陈鑫等[4]在大鼠创伤性脑外伤模型中，通过测定脑外伤后脑组织线粒体超氧化物歧化酶和丙二醛水平的变化，发现黄芪可通过影响线粒体功能来抑制脑外伤后的脂质过氧化，减轻创伤性脑损伤的继发性脑损害，从而改善预后。
本实验结果显示，实验组脊髓损伤后给予黄芪注射液腹腔注射后脊髓组织中丙二醛浓度明显低于各时相点对照组，超氧化物歧化酶活性显著升高。光镜下组织病理学检查发现实验组经过黄芪处理后脊髓组织各时间点出血、水肿、神经细胞变性较轻。上述结果表明，黄芪可明显抑制脊髓损伤后的脂质过氧化损伤,减轻脊髓继发性损害。
参考文献
［1］ 杨立利等.脊髓损伤患者的免疫功能变化及意义。临床骨科杂志，2001,4（4）：316-318。
［2］裴林，刘唤荣，张少丹，等.黄芪对缺氧缺血性脑损伤幼鼠一氧化氮、丙二醛含量的影响:中国中西医结合急救杂志，2001,4（8）：222-4
［3］金若敏，张晓晨，陈长勋，等.黄芪毛状根药理作用的研究:中国中药杂志,1999,24(10):619-21
［4］陈鑫，朱志安，马延斌，等.黄芪对脑外伤后脑组织线粒体超氧化物歧化酶和丙二醛水平影响的实验研究: 创伤外科杂志，2000,2(4):204-6
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