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目的：建立一种有效、方便的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）的酶解分离方法。方法：采用二步酶消化法分离VSM-Cs,显微镜下观察细胞形态,锥虫蓝染色观察细胞成活率,荧光显微镜检测细胞内钙荧光强度（FI）在KCl刺激下的变化,全细胞膜片钳记录电压-依赖性钾电流。结果：分离的VSMCs镜下呈典型的梭状或长条状,成活率达68.0%;VSMCs内钙FI在KCl刺激下可增高;并可记录到稳定的电压-依赖性钾电流。结论：本法可获得大量形态和结构良好的VSMCs,且胞膜离子通道功能良好。