【摘 要】
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为了研究双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)信号通路对羊痘病毒复制的影响,试验构建了PKR基因的真核表达载体,并在He La细胞中实现了PKR的过表达;从相关文献中筛选了靶向PKR的2对si
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心; 重庆出入境检验检疫局;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31201892);“863”国家高技术研究发展计划项目(2012AA101304);国家质检总局公益性行业科研专项(201310093);甘肃省自然科学基金项目(1208RJZA101)
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为了研究双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)信号通路对羊痘病毒复制的影响,试验构建了PKR基因的真核表达载体,并在He La细胞中实现了PKR的过表达;从相关文献中筛选了靶向PKR的2对siRNA,检测其对PKR的干扰效果,以RT-PCR方法扩增PKR基因,克隆入表达载体pc DNA3.1(-)/Myc-His(B),对重组质粒进行双酶切及测序鉴定,将阳性重组质粒或siRNAs分别转染He La细胞,Western-blot检测PKR蛋白的表达水平。结果表明:试验成功构建了PKR基因的真核表达载体pc DNA3.1(-)-PKR,重组质粒在He La细胞中得到了表达;2对siRNA具有较好的干扰效果,其中siRNA1、siRNA2对PKR的干扰效率分别达到76%和52%。
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