论文部分内容阅读
目的：研究Smad 交互蛋白1（SIP1）在人增生性瘢痕组织中的表达及其对纤维化相关因子的影响。方法收集临床整形手术切取的9例患者增生性瘢痕标本及其自体正常皮肤标本。分离培养原代人增生性瘢痕成纤维细胞（HSFBs），取第3～5代细胞用于实验。（1）免疫组织化学法检测增生性瘢痕组织标本及其自体正常皮肤组织标本中SIP1的表达情况。（2）真核表达质粒pcDNA 3．1（＋）/SIP1转染HSFBs。按照随机数字表法将细胞分为6组：对照组；pcDNA3．1（＋）组（空载体组）；pcDNA3．1（＋）/SIP1组；对照＋TGF-β1组；pcDNA3．1（＋）＋TGF-β1组；pcDNA3．1（＋）/SIP1＋TGF-β1组。于转染后第48 h和72 h分别提取细胞总RNA和细胞总蛋白。应用实时荧光定量PCR法检测各组细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及结缔组织生长因子（CTGF）的mRNA表达水平；采用Western-blotting检测α-SMA的蛋白表达水平。结果（1）免疫组织化学染色结果显示：增生性瘢痕组织中SIP1表达明显低于自体正常皮肤组织。（2）pcDNA3．1（＋）/SIP1转染HSFBs后纤维化相关因子的表达：①α-SMA的mRNA和蛋白表达水平：与对照组和pcDNA3．1（＋）组相比，pcDNA3．1（＋）/SIP1组在 mRNA和蛋白表达水平均显著下调，差异有统计学意义（P＜0．05）。当细胞给予TGF-β1刺激后，各组α-SMA表达均上调，但pcDNA3．1（＋）/SIP1＋TGF-β1组mRNA和蛋白表达水仍低于对照＋TGF-β1组，差异有统计学意义（P＜0．05）。② CTGF的mRNA表达水平：与对照组和pcDNA3．1（＋）组相比，pcDNA3．1（＋）/SIP1组在mRNA表达水平显著下调，差异有统计学意义（P＜0．05）。当细胞给予TGF-β1刺激后，各组CTGF表达均显著上调，但pcDNA3．1（＋）/SIP1＋TGF-β1组mRNA表达水仍低于对照＋TGF-β1组，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论与正常皮肤组织相比较，SIP1在增生性瘢痕组织中低表达。SIP1基因转染 HSFBs 可降低纤维化相关因子α-SMA 和CTGF的表达，有利于抑制瘢痕形成和减轻挛缩。