SEPT6对膀胱癌EJ细胞增殖、凋亡的影响及其机制的研究

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目的 探讨干扰SEPT6基因的表达对膀胱癌EJ细胞株增殖、凋亡的影响以及潜在的机制.方法 用特异性SEPT6基因小干扰RNA序列转染膀胱癌EJ细胞作为SEPT6沉默组,以转染非特异性序列作为对照组.采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测转染效率,流式细胞仪检测转染后细胞的周期变化;同时采用Hoechst 33342细胞染色法检测转染后EJ细胞的凋亡;Western blotting检测相关信号通路蛋白的表达变化.结果 QPCR检测显示,SEPT6沉默组SEPT6 mRNA的表达水平为(23.4±2.3)%,显著低于对照组的(100.0±2.2)%,差异有统计学意义(P<0.05).转染72 h后,对照组和SEPT6沉默组细胞的吸光值(A)分别为3.7+0.4、2.3±0.1,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞仪检测显示,转染48 h后,对照组和SEPT6沉默组G0/C1期细胞比例分别为(43.3±4.2)%和(64.5±2.8)%,差异有统计学意义(P<0.05).Hoechst 33342细胞凋亡荧光染色结果 显示,对照组和SEPT6沉默组的细胞凋亡比例分别为(8.2±1.4)%、(24.2±3.2)%,差异有统计学意义(P<0.05).Western blotting检测显示,与对照组比较,SEPT6沉默组PTEN蛋白表达增加、Akt蛋白磷酸化降低.结论 干扰SEPT6基因的表达能显著抑制膀胱癌EJ细胞的增殖,导致其凋亡增加.其机制可能与PTEN/Akt信号通路的激活有关.“,”Objective To explore the effects of SEPT6 silence on biological characteristics of bladder cancer EJ cells as well as the underlying mechanism. Methods EJ cells transfected with specific small interfering RNA sequence were used as SEPT6 silence group, and cells transfected with scramble RNA sequence were used as control group. The effects of SEPT6 silence on cell proliferation were detected by CCK-8 assay and cell cycle distribution was evaluated by flow cytometry. The effects on cell apoptosis were detected by Hoechst 33342 staining assay. The phosphorylation of Akt and PTEN protein were evaluated by Western blotting assay. Results In SEPT6 silence group, SEPT6 mRNA level was(23.4±2.3)%, while that in control group was(100.0±2.2)%. After transfection for 72 h, the light absorption value was 2.3±0. 1 in SEPT6 silence group, while that in control group was 3.7±0.4. After transfection for 48 h, the percentage of cells in G0/Gl phase was (64.5±2.8)% by flow cytometry in SEPT6 silence group, while that in control group was (43.3±4.2) %. The percentage of apoptosis cells in SEPT6 silence group was (24.2±3.2) % and that in control group was (8.2±1.4) % by Hoechst 33342 staining assay. The phosphorylation of Akt was decreased while PTEN expression increased after SEPT6 silence. Conclusion SEPT6 silence can inhibit the proliferation of bladder cancer EJ cell and lead to the increase of apoptosis. PTEN/ Akt signal pathway may involve in this process.
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