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目的通过测定结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者血清热休克蛋白60(HSP60)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原242(CA242)、癌抗原724(CA724)及细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)水平变化,探讨最佳检测方案。方法选取2017年6—12月唐山市人民医院收治的CRC患者156例作为CRC组,另选取同期来院体检健康者40例作为正常对照组。收集两组受试者血清,采用酶联免疫吸附双抗体夹心法测定血清HSP60水平,采用电化学发光法测定CEA、CA242、CA724、CYFRA21-1水平;分析CRC组血清HSP60水平与临床特征之间的关系;以病理诊断为金标准,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析HSP60、CEA、CA242、CA724、CYFRA21-1单项检测及不同联合检测方案对CRC的诊断效能。结果与正常对照组比较,CRC组血清HSP60、CEA、CA242、CA724和CYFRA21-1水平均有所升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。CRC组血清HSP60水平与患者性别、年龄、病变部位无关(P> 0.05),TNM分期I+Ⅱ期患者血清HSP60水平低于Ⅲ+Ⅳ期患者,差异有统计学意义(P<0.01)。单项检测诊断效能分析显示,ROC曲线下面积(area under the cure,AUC):HSP60(0.858)> CEA(0.801)> CYFRA21-1(0.793)>CA724(0.708)> CA242(0.706),5种肿瘤标志物单项检测的诊断效能中等,其中HSP60单项检测的诊断效能最高。不同联合检测方案诊断效能分析显示,AUC:HSP60+CEA+CA242+CA724+CYFRA21-1(0.973)> HSP60+CEA(0.924)> CEA+CA242+CA724+CYFRA21-1 (0.916)> CEA+CA242+CA724(0.846),5种肿瘤标志物联合检测诊断效能最高,优于其他组合方案,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论HSP60对CRC的诊断及TNM分期有较高的应用价值,HSP60+CEA+CA242+CA724+CYFRA21-1联合检测可显著提高CRC的诊断率。