【摘 要】
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为在噬热栖热菌(Thermus thermophilus)中开发无需筛选标记的基于双交换同源重组的基因无痕敲除手段,以大质粒及染色体上的TTP0042与TTC0340_0341为靶基因,构建含有其两侧同
【基金项目】
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国家自然科学基釐项目(31700059);陕西省自然科学基础研究计划项目(2018JQ3037);陕西省高校科协青年人才托举计划项目(20180210)
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为在噬热栖热菌(Thermus thermophilus)中开发无需筛选标记的基于双交换同源重组的基因无痕敲除手段,以大质粒及染色体上的TTP0042与TTC0340_0341为靶基因,构建含有其两侧同源臂的基因敲除载体并转化T.thermophilusHB27细胞,将转化混合物涂布于不含筛选物质的培养基上,通过PCR及Southern杂交检验转化子的基因型。结果表明,采用线状的TTP0042基因敲除载体进行转化,获取表观Δ0042突变体的概率为10^-4,而使用闭合环状载体,该概率可达10^-3;基因型
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