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【摘要】为提高猴菇多糖得率，增加提取率，采用内部沸腾法提取猴菇多糖。先用乙醇润湿物料，再加入热水让内部乙醇沸腾，快速提取多糖。结果显示：乙醇体积分数为15%、提取温度90℃时，提取过程在20min内完成，猴菇多糖得率为9.24%，较传统方法有所提高。
【关键词】内部沸腾法；猴菇多糖；提取
【中图分类号】R284.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-3089（2017）19-0283-02
猴头菇（学名：Hericiumerinaceus），外形似猴子的头，因而得名。孢子透明无色，表面光滑，呈球形或近似球形。猴头菇是著名的药食两用菌种，其多糖是猴头菇中重要的活性物质，研究证明，猴头菇多糖对小鼠血清有抗氧化能力[1]，能延长小鼠负重游泳时间，缓解疲劳[2]，还具有抗衰老，护肝的作用，且毒副作用相对较小[3]。目前，猴头菇多糖的提取方法有热水浸提法[2-4]，超声提取[5-6]，酶法提取[7-8]，但少见有内部沸腾法提取，且对于内部沸腾法提取的影响因素报道甚少。
内部沸腾法在其它食用菌多糖的提取中使用较多，如陈晓光早在2011年就使用此法提取香菇多糖。此法是先用少量乙醇试液润湿香菇，再快速加入高温的提取液，使内部乙醇汽化，提高多糖提取率。本实验采用内部沸腾法提取猴菇多糖，探讨了不同外界条件对提取率的影响，为猴菇多糖的提取提供一定的技术依据。
一、材料与方法
（一）材料与试剂
猴头菇于超市购买，产地黑龙江；40℃烘干后粉碎至粉末状。95%乙醇（AR）：无锡市亚太联合化工有限公司；苯酚（AR）：无锡市亚太联合化工有限公司，浓硫酸（AR）：永茂化工有限公司；葡萄糖（AR）：济南鑫旺化工有限公司；TCA（AR）：永茂化工有限公司。
（二）仪器与设备
真空干燥箱，真空抽滤机；电热恒温水浴锅；电炉；粉碎机；搅拌器。
（三）实验方法
1.猴头菇总糖提取工艺
（1）内部沸腾法：猴头菇粉末→内部沸腾法提取→抽滤→浓缩→脱色→TCA法去蛋白→乙醇醇沉→离心→干燥→粗浸膏。
（2）传统法：猴头菇粉末→热水提取→抽滤→浓缩→脱色→TCA法去蛋白→乙醇醇沉→离心→干燥→粗浸膏。
2.内部沸腾法提取猴头菇多糖
选用提取温度，乙醇体积分数和提取时间三个因素来探测外部条件对猴头菇多糖得率的影响，其条件分别如下：
①猴头菇10g，提取温度90℃，提取时间20min，乙醇体积分数为5%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数10%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数20%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数25%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数30%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数40%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数50%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数60%的乙醇溶液20ml。
②猴头菇10g，体积分数20%的乙醇溶液20ml，提取时间20min，提取温度分别为70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃、110℃。
③猴头菇10g，乙醇体积分数20%的乙醇溶液20ml，提取温度控制在90℃，提取时间控制在5min到40min之间，以每5min的速度递增。
提取后的猴菇多糖再進行抽滤，收集滤液备用。
3.传统方法提取猴头菇多糖
10g猴头菇粉末，加入200ml水，80℃加热回流3h，抽滤，收集滤液备用。
4.提取液脱色
抽滤后的猴头菇多糖提取液中加入2%的粒状活性炭，60℃，水浴60min。
5.TCA法去蛋白
脱色后的粗多糖溶液中，加入0.15%的TCA溶液，振摇20min后，静止30min。
6.醇沉
将去除蛋白后的提取液浓缩至猴头菇多糖的1.3倍，加入95%乙醇使醇含量控制在75%，静止、过夜、过滤、50℃真空干燥。取部分浸膏测定多糖含量。
（四）分析方法
1.猴头菇总糖测定
总糖测定采用苯酚-硫酸法，精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖15.0mg于100ml容量瓶中，加水至刻度定容，溶解摇匀。分别取0.00、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00ml，加水补至2.00ml，再加入1ml5%的苯酚溶液，浓硫酸5ml，摇匀、静止、冷却。30min后以蒸馏水为空白，490nm处测定吸光度，绘制标准曲线。得线性方程A=0.006C+0.035，R2=0.9996。
2.还原糖含量测定
选用比色法——3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量，无水葡萄糖102.00mg置于100ml容量瓶中，加水溶解稀释至刻度。分别吸取上述溶液0.00、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45ml于不同试管中，分别加水至总体积为0.5ml，试管中依次加入0.5mlDNS溶液，摇匀，沸水加热5min，流动水冷却，每管分别加入4ml蒸馏水，摇匀，以空白管为参比溶液，540nm处测吸光度，得标准曲线方程为：A=0.0028X-0.0165，R2=0.0991。
3.猴菇多糖含量的计算
Y（%）=（C1-C2）×0.9×100
Y：猴菇多糖含量/%；C1：猴菇总糖含量/%；C2：猴菇中还原糖量/%；0.9：还原糖和多糖间换算系数。
二、实验结果分析
（一）单因素对多糖提取率影响情况
1.乙醇体积分数对提取率的影响
随着乙醇体积分数增大，猴头菇多糖提取率出现先增加而后再降低的情况。温度乙醇体积分数在15%达到最大值，多糖得率为9.24%。随着乙醇体积分数的增加，多糖的溶解度降低，解析不充分，因此，若乙醇体积分数过高，多糖得率反而降低。而当乙醇体积分数小于15%时，渗入猴菇内部乙醇太少，沸腾不够，提取效率不也不高。 2.提取温度对猴头菇多糖提取率影响
提取温度控制在90℃时，多糖得率较高，为8.98%。按照1.3.2中②的方案，图2中乙醇体积分数为20%，此时乙醇溶液的共沸点为87.1℃，只有当温度高于此温度时，猴头菇内部乙醇才会产生沸腾，提取过程为对流扩散。低于此温度时，多糖的提取过程则为分子扩散，在20min内，扩散不完全，提取率低。温度高于90℃后，猴菇内部孔径出现堵塞、坍塌、影响提取速率。
3.提取时间对猴菇多糖得率的影响
从图3可以看出，采用内部沸腾法时，猴菇多糖得率在20min时达到最大值，为9.16%，之后基本趋于稳定。在20min内，猴头菇多糖几乎能全部提取出来，延长时间，对多得率没有促进作用。
（二）内部沸腾法与传统方法比较
从表1可以看出，内部沸腾法提取效果明显优于传统方法，时间仅为20min，多糖得率高于传统方法4.37%。
三、结论
在本实验中，猴头菇多糖的最佳提取工艺参数依次为：乙醇体积分数15%；提取温度为90℃；提取时间为20min。在上述条件下，猴头菇多糖的得率为9.24%，比传统的煎煮法高。由此可见，内部沸腾法适合于猴菇多糖的提取，且高效安全。
参考文献
[1]杜志强，杨晨晨，王建英.猴头菇多糖对小鼠血清抗氧化能力的影响[J].食品研究與开发，2011，09：56-58.
[2]杨雪，张海悦，张鑫，李震.猴头菇多糖对小鼠抗疲劳作用研究[J].食品工业科技，2015，13：368-370.
[3]樊伟伟，黄惠华.猴头菇多糖研究进展[J].食品科学，2008，01：355-358.
[4]吴志明，李公斌，辛秀兰，刘玮.猴头菇多糖的提取工艺[J].食品研究与开发，2011，07：36-38.
[5]赵洪梅，孙君，谢春阳.响应面优化超声波提取猴头菇多糖工艺的研究[J].农产品加工（创新版），2011，11：73-77.
[6]胡斌杰，师兆忠.超声法提取猴头菇多糖最佳工艺优化研究[J].化学世界，2009，09：557-560.
[7]吴美媛，周英，何慧明，王劲峰，王超，王喜周.猴头菇多糖复合酶法提取及重金属去除工艺研究[J].食品研究与开发，2013，16：15-17.
[8]张帅，沈楚燕，董基.酶法提取猴头菇多糖的研究[J].河南工业大学学报（自然科学版），2010，02：76-79.
【关键词】内部沸腾法；猴菇多糖；提取
【中图分类号】R284.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-3089（2017）19-0283-02
猴头菇（学名：Hericiumerinaceus），外形似猴子的头，因而得名。孢子透明无色，表面光滑，呈球形或近似球形。猴头菇是著名的药食两用菌种，其多糖是猴头菇中重要的活性物质，研究证明，猴头菇多糖对小鼠血清有抗氧化能力[1]，能延长小鼠负重游泳时间，缓解疲劳[2]，还具有抗衰老，护肝的作用，且毒副作用相对较小[3]。目前，猴头菇多糖的提取方法有热水浸提法[2-4]，超声提取[5-6]，酶法提取[7-8]，但少见有内部沸腾法提取，且对于内部沸腾法提取的影响因素报道甚少。
内部沸腾法在其它食用菌多糖的提取中使用较多，如陈晓光早在2011年就使用此法提取香菇多糖。此法是先用少量乙醇试液润湿香菇，再快速加入高温的提取液，使内部乙醇汽化，提高多糖提取率。本实验采用内部沸腾法提取猴菇多糖，探讨了不同外界条件对提取率的影响，为猴菇多糖的提取提供一定的技术依据。
一、材料与方法
（一）材料与试剂
猴头菇于超市购买，产地黑龙江；40℃烘干后粉碎至粉末状。95%乙醇（AR）：无锡市亚太联合化工有限公司；苯酚（AR）：无锡市亚太联合化工有限公司，浓硫酸（AR）：永茂化工有限公司；葡萄糖（AR）：济南鑫旺化工有限公司；TCA（AR）：永茂化工有限公司。
（二）仪器与设备
真空干燥箱，真空抽滤机；电热恒温水浴锅；电炉；粉碎机；搅拌器。
（三）实验方法
1.猴头菇总糖提取工艺
（1）内部沸腾法：猴头菇粉末→内部沸腾法提取→抽滤→浓缩→脱色→TCA法去蛋白→乙醇醇沉→离心→干燥→粗浸膏。
（2）传统法：猴头菇粉末→热水提取→抽滤→浓缩→脱色→TCA法去蛋白→乙醇醇沉→离心→干燥→粗浸膏。
2.内部沸腾法提取猴头菇多糖
选用提取温度，乙醇体积分数和提取时间三个因素来探测外部条件对猴头菇多糖得率的影响，其条件分别如下：
①猴头菇10g，提取温度90℃，提取时间20min，乙醇体积分数为5%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数10%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数20%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数25%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数30%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数40%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数50%的乙醇溶液20ml、乙醇体积分数60%的乙醇溶液20ml。
②猴头菇10g，体积分数20%的乙醇溶液20ml，提取时间20min，提取温度分别为70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃、110℃。
③猴头菇10g，乙醇体积分数20%的乙醇溶液20ml，提取温度控制在90℃，提取时间控制在5min到40min之间，以每5min的速度递增。
提取后的猴菇多糖再進行抽滤，收集滤液备用。
3.传统方法提取猴头菇多糖
10g猴头菇粉末，加入200ml水，80℃加热回流3h，抽滤，收集滤液备用。
4.提取液脱色
抽滤后的猴头菇多糖提取液中加入2%的粒状活性炭，60℃，水浴60min。
5.TCA法去蛋白
脱色后的粗多糖溶液中，加入0.15%的TCA溶液，振摇20min后，静止30min。
6.醇沉
将去除蛋白后的提取液浓缩至猴头菇多糖的1.3倍，加入95%乙醇使醇含量控制在75%，静止、过夜、过滤、50℃真空干燥。取部分浸膏测定多糖含量。
（四）分析方法
1.猴头菇总糖测定
总糖测定采用苯酚-硫酸法，精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖15.0mg于100ml容量瓶中，加水至刻度定容，溶解摇匀。分别取0.00、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00ml，加水补至2.00ml，再加入1ml5%的苯酚溶液，浓硫酸5ml，摇匀、静止、冷却。30min后以蒸馏水为空白，490nm处测定吸光度，绘制标准曲线。得线性方程A=0.006C+0.035，R2=0.9996。
2.还原糖含量测定
选用比色法——3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量，无水葡萄糖102.00mg置于100ml容量瓶中，加水溶解稀释至刻度。分别吸取上述溶液0.00、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45ml于不同试管中，分别加水至总体积为0.5ml，试管中依次加入0.5mlDNS溶液，摇匀，沸水加热5min，流动水冷却，每管分别加入4ml蒸馏水，摇匀，以空白管为参比溶液，540nm处测吸光度，得标准曲线方程为：A=0.0028X-0.0165，R2=0.0991。
3.猴菇多糖含量的计算
Y（%）=（C1-C2）×0.9×100
Y：猴菇多糖含量/%；C1：猴菇总糖含量/%；C2：猴菇中还原糖量/%；0.9：还原糖和多糖间换算系数。
二、实验结果分析
（一）单因素对多糖提取率影响情况
1.乙醇体积分数对提取率的影响
随着乙醇体积分数增大，猴头菇多糖提取率出现先增加而后再降低的情况。温度乙醇体积分数在15%达到最大值，多糖得率为9.24%。随着乙醇体积分数的增加，多糖的溶解度降低，解析不充分，因此，若乙醇体积分数过高，多糖得率反而降低。而当乙醇体积分数小于15%时，渗入猴菇内部乙醇太少，沸腾不够，提取效率不也不高。 2.提取温度对猴头菇多糖提取率影响
提取温度控制在90℃时，多糖得率较高，为8.98%。按照1.3.2中②的方案，图2中乙醇体积分数为20%，此时乙醇溶液的共沸点为87.1℃，只有当温度高于此温度时，猴头菇内部乙醇才会产生沸腾，提取过程为对流扩散。低于此温度时，多糖的提取过程则为分子扩散，在20min内，扩散不完全，提取率低。温度高于90℃后，猴菇内部孔径出现堵塞、坍塌、影响提取速率。
3.提取时间对猴菇多糖得率的影响
从图3可以看出，采用内部沸腾法时，猴菇多糖得率在20min时达到最大值，为9.16%，之后基本趋于稳定。在20min内，猴头菇多糖几乎能全部提取出来，延长时间，对多得率没有促进作用。
（二）内部沸腾法与传统方法比较
从表1可以看出，内部沸腾法提取效果明显优于传统方法，时间仅为20min，多糖得率高于传统方法4.37%。
三、结论
在本实验中，猴头菇多糖的最佳提取工艺参数依次为：乙醇体积分数15%；提取温度为90℃；提取时间为20min。在上述条件下，猴头菇多糖的得率为9.24%，比传统的煎煮法高。由此可见，内部沸腾法适合于猴菇多糖的提取，且高效安全。
参考文献
[1]杜志强，杨晨晨，王建英.猴头菇多糖对小鼠血清抗氧化能力的影响[J].食品研究與开发，2011，09：56-58.
[2]杨雪，张海悦，张鑫，李震.猴头菇多糖对小鼠抗疲劳作用研究[J].食品工业科技，2015，13：368-370.
[3]樊伟伟，黄惠华.猴头菇多糖研究进展[J].食品科学，2008，01：355-358.
[4]吴志明，李公斌，辛秀兰，刘玮.猴头菇多糖的提取工艺[J].食品研究与开发，2011，07：36-38.
[5]赵洪梅，孙君，谢春阳.响应面优化超声波提取猴头菇多糖工艺的研究[J].农产品加工（创新版），2011，11：73-77.
[6]胡斌杰，师兆忠.超声法提取猴头菇多糖最佳工艺优化研究[J].化学世界，2009，09：557-560.
[7]吴美媛，周英，何慧明，王劲峰，王超，王喜周.猴头菇多糖复合酶法提取及重金属去除工艺研究[J].食品研究与开发，2013，16：15-17.
[8]张帅，沈楚燕，董基.酶法提取猴头菇多糖的研究[J].河南工业大学学报（自然科学版），2010，02：76-79.