【摘 要】
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垂体腺苷酸环化酶激活肽（pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP）是由下丘脑合成并分泌,存在于人（Homo sapiens）和动物体内的生物活性物质,能够刺激垂体生长激素（growth hormone,GH）的合成与分泌,从而促进动物体的生长发育。本研究首先克隆了猪（Sus scrofa）PACAP基因（p PACAP）的全长
【基金项目】
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国家转基因生物新品种培育科技重大专项（No.2014ZX08006-003）；
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垂体腺苷酸环化酶激活肽（pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP）是由下丘脑合成并分泌,存在于人（Homo sapiens）和动物体内的生物活性物质,能够刺激垂体生长激素（growth hormone,GH）的合成与分泌,从而促进动物体的生长发育。本研究首先克隆了猪（Sus scrofa）PACAP基因（p PACAP）的全长c DNA,利用油红O染色技术和q RT-PCR技术研究PACAP基因在3T3-L1前体脂肪细胞成脂分化过程中的表达规律;继而构建了真核表达载体p EGFP-p PACAP,将其转染至小鼠（Mus musculus）3T3-L1前体脂肪细胞,48 h内采用CCK-8法检测细胞生长情况并于48 h后检测3T3-L1前体脂肪细胞中的p PACAP、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,FAS）和乙酰辅酶A羧化酶（acetyl-Co A carboxylase,ACC）m RNA的表达及pacap-EGFP融合蛋白的表达。成脂分化结果表明,PACAP m RNA随着脂肪细胞的成熟,其表达量逐渐上升,在第4天时,表达量最高;双酶切及测序结果表明,成功构建了p PACAP基因的真核表达载体p EGFP-p PACAP;真核表达载体转入培养的3T3-L1前体脂肪细胞中后,在荧光显微镜下,重组质粒组和空载体组均发出绿色荧光,48 h时转染效率最高,且PACAP、FAS和ACC m RNA相对表达量均有极显著的提高（P<0.01）,成功检测到pacap融合蛋白。本研究结果表明,PACAP参与到脂肪形成的机制中。该结果为体外研究猪PACAP基因对脂肪合成代谢及其机体代谢的调节机制提供了理论依据。
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