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目的 应用内部核糖体插入位点（IRES）序列构建单启动子双顺反子穿梭载体pIRES-p16ink4a—hRb1并鉴定，观察其导入骨肉瘤细胞后对细胞周期的调控。方法 利用基因工程技术，将p16ink4a与hRb1全长cDNA编码区依次亚克隆至pIRES载体中，质粒构建通过PCR、双酶切与测序鉴定；脂质体转染至p161nk4a表达缺失、hRb1表达阳性的骨肉瘤细胞株MG63，G418筛选获得抗性克隆，通过RT-PCR和Western blot法分析外源基因表达；流式细胞术分析细胞周期特异性和细胞凋亡率，四甲基