人MT2A基因在哺乳动物细胞株中的定位与表达

来源 :安徽医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：az4620

【摘要】

：

目的用基因克隆方法构建带FLAG—tag的人金属硫蛋白2A（MT2A）真核表达载体，用其转染HEK293T，COS-7细胞观察MT2A在增殖细胞内的表达和定位。方法设计带FLAG-tag的引物，以人MT2A全长c

【作者】

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李新颖潘林鑫耿慧武刘君刘晓颖范礼斌

【机构】

：

安徽医科大学生命科学学院生物学教研室

【出处】

：

安徽医科大学学报

【发表日期】

：

2013年3期

【关键词】

：

金属硫蛋白细胞定位转染免疫印迹 metallothionein cellular localization transfection West

【基金项目】

：

安徽省教育厅自然科学重点科研项目（编号KJ2010A187）,安徽省自然科学基金项目（编号11040606M170）,安徽省自然科学基金项目（编号11040606M164）

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目的用基因克隆方法构建带FLAG—tag的人金属硫蛋白2A（MT2A）真核表达载体，用其转染HEK293T，COS-7细胞观察MT2A在增殖细胞内的表达和定位。方法设计带FLAG-tag的引物，以人MT2A全长cDNA序列的质粒为模板，PCR法扩增MT2A全长序列，然后插入pCDNA3．1中构建pCDNA3．1-MT2A—FLAG质粒；将构建的质粒转染至HEK293T细胞，提取总蛋白，进行Western blot检测；脂质体法转染至COS-7细胞，荧光显微镜下观察MT2A表达的蛋白在细胞内定位。结果正确构

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