【摘 要】
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目的比较5种痰标本前处理方法,选择适用于基层结核病实验室痰中结核分枝杆菌DNA提取的痰标本前处理方法。方法分别采用DDT、NaOH、NALC-NaOH、Trypsin、Chymotrypsin等5种方
【基金项目】
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长沙市科技局项目(项目编号K1104052-21)
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目的比较5种痰标本前处理方法,选择适用于基层结核病实验室痰中结核分枝杆菌DNA提取的痰标本前处理方法。方法分别采用DDT、NaOH、NALC-NaOH、Trypsin、Chymotrypsin等5种方法对所收集标本进行前处理,比较提取DNA模板的浓度、纯度和核酸扩增结果。结果经过5种前处理方法处理后,所提取DNA浓度(ng/μl)的最小值依次是27.30、4.10、9.30、18.60和14.80,最大值依次是84.10、40.20、26.10、111.00和159.00,均值依次是(52.84±19.17)、(16.69±12.72)、(14.38±4.57)、(48.65±25.75)和(53.79±46.27);以OD260/OD280的比值衡量DNA纯度,其最小值依次是1.75、1.60、1.64、1.60和1.62,最大值依次是1.86、1.85、1.79、1.88和1.84,均值依次是(1.80±0.29)、(1.66±0.88)、(1.74±0.40)、(1.76±0.86)、(1.73±0.74);16份已知阳性标本采用DDT、NALC-NaOH两种方法处理后扩增结果全部阳性,而采用NaOH、Trypsin、Chymotrypsin处理后分别出现了3、8和5份标本阴性。结论在基层结核病实验室,对拟进行结核分枝杆菌DNA提取的痰标本应首选二硫代苏糖醇进行前处理,其次选择N-乙酰-L-半胱氨酸-氢氧化钠。
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