葛根素对高糖环境下H2O2诱导人足细胞氧化应激及线粒体损伤的保护机制

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目的 探讨葛根素对高糖环境下H2O2诱导的人永生型足细胞氧化应激及线粒体损伤的影响及其作用机制。方法将足细胞分组给予高糖(30 mmol/L Glucose)及不同浓度H2O2刺激,同时加不同浓度葛根素干预48 h。分组如下:H0组(H2O20μmol/L)、H100组(H2O2100μmol/L)、H100+P3.3组(H2O2100μmol/L+葛根素3.3μmol/L)、H100+P10组(H2O2100μmol/L+葛根素10μmol/L)、H200组(H2O2200μmol/L)、H200+P3.3组(H2O2200μmol/L+葛根素3.3μmol/L)、H200+P10组(H2O2200μmol/L+葛根素10μmol/L)。CCK-8检测细胞存活率,Western blotting检测TOMM22的蛋白表达;提取基因组DNA,qPCR检测mtDNA的表达;提取RNA,qPCR检测TFAM、NRF1 mRNA表达;测定各组ATP水平、ROS水平,并评价各组足细胞线粒体呼吸功能。结果 与H0组相比,H100、H200组ROS水平升高(P<0.01),H100、H100+P3.3组mtDNA拷贝数均减少(P<0.01),TFAM mRNA表达降低,基础呼吸、质子渗漏、最大耗氧量、非线粒体氧消耗均升高(P<0.05);与H100组相比,H100+P3.3组ROS减少(P<0.05),TFAM mRNA、NRF1 mRNA表达均增加(P<0.05,P<0.01),ATP生成增加(P<0.05),基础呼吸、质子渗漏均降低(P<0.05),而H100+P10组mtDNA拷贝数增加(P<0.05),NRF1 mRNA、基础呼吸、质子渗漏、非线粒体消耗均升高(P<0.05);与H100+P3.3组相比,H100+P10组mtDNA拷贝数明显增加(P<0.01),基础呼吸、质子渗漏、非线粒体氧消耗、ATP水平均升高(P<0.05);与H200组相比,H200+P3.3、H200+P10组ROS水平明显降低(P<0.01),H200+P10组NRF1 mRNA表达增加(P<0.01)、非线粒体氧消耗增加(P<0.05);与H200+P3.3组相比,H200+P10组ROS水平增多(P<0.01),TFAM mRNA表达增加(P<0.05)、NRF1 mRNA表达增加(P0.05)。结论 葛根素能部分缓解高糖及H2O2诱导的足细胞氧化应激及线粒体损伤。
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