【摘 要】
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探讨从恶性肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMCs)中高效扩增淋巴细胞的方法,取3例恶性肿瘤患者的PBMCs,每例患者重复3次,在GMP实验室体系下,经淋巴细胞刺激因子体外诱导扩增淋巴
【机 构】
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中国人民解放军总医院胸外科,中国人民解放军总医院肿瘤科
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探讨从恶性肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMCs)中高效扩增淋巴细胞的方法,取3例恶性肿瘤患者的PBMCs,每例患者重复3次,在GMP实验室体系下,经淋巴细胞刺激因子体外诱导扩增淋巴细胞和观察扩增情况,应用流式细胞仪分析扩增前后总CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴细胞、CD3-CD16+56+(NK细胞)、CD3+CD16+56+(NKT细胞)以及CD4+和CD8+T细胞比值的变化,分析培养前后各淋巴细胞亚群的扩增情况和重复性,同时观察淋巴细胞体外扩增培养后回输患者的生物安全性。结果表明,CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD16+56+细胞比例较培养前明显增加(P<0.01),而CD3+CD4+、CD3-CD16+56+细胞比例、CD4+和CD8+T细胞比值则明显的降低(P<0.01)。CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD16+56+细胞增殖倍数的中位数分别为487.9、832.5和2540.6;而CD3+CD4+和CD3-CD16+56+则分别为159.6和155.5。细胞体外扩增培养前后亚型和扩增倍数的重复性较差,在本研究中只有CD3+T细胞在体外培养前后、CD3+CD16+56+细胞在培养后的CV值在10%以内。培养扩增后淋巴细胞细菌、真菌、支原体、外来病毒及内毒素检查后无阳性发现,所有患者细胞回输治疗后无明显的毒副反应。在本研究体系下体外诱导扩增培养肿瘤患者自体外周血NK细胞及致敏淋巴细胞效率较高,细胞毒性细胞比例增高较大,具有良好的生物安全性,为恶性肿瘤患者应用NK细胞进行过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法。
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