【摘 要】
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利用PCR技术得到嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)过氧化氢酶基因perA,将该基因与表达载体pKK223-3连接构建重组质粒pK-perA,转化大肠杆菌过氧化氢酶HPⅠ和HP
【机 构】
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江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室
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利用PCR技术得到嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)过氧化氢酶基因perA,将该基因与表达载体pKK223-3连接构建重组质粒pK-perA,转化大肠杆菌过氧化氢酶HPⅠ和HPⅡ双缺突变株UM2,得到重组大肠杆菌UM2-1. 酶活测定结果表明,表达产物具有正常的生物学活性.SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带,单体Mr=86×103,与嗜热脂肪芽孢杆菌所产酶相同.实验表明,重组质粒在宿主UM2中有较好的稳定性,在无选择压力条件下传代60次基本保持稳定,传代100次重组质粒保留80%以上.摇瓶实验确定重组菌的最佳表达条件为:IPTG浓度,0.75 mmol/L;诱导时间3 h;培养基起始pH 6.5;诱导温度37 ℃;装液量50 mL/250 mL.在优化条件下,重组菌产生的过氧化氢酶占菌体总蛋白的8%,酶活力可达35 U/mL,是原始菌株Bacillus stearothermophilus IAM11001的11.7倍. 图2 表1 参10
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