【摘 要】
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目的构建弓形虫RH株致密颗粒抗原GRA8的原核和真核重组表达质粒.方法参照GRA8序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增出编码GRA8的基因片段,克隆至pMD18-T
【机 构】
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深圳市疾病预防控制中心,深圳市疾病预防控制中心,中山大学基础医学院
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目的构建弓形虫RH株致密颗粒抗原GRA8的原核和真核重组表达质粒.方法参照GRA8序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增出编码GRA8的基因片段,克隆至pMD18-T载体;菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析;各组阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达质粒pGEX-4T-2和真核表达载体pVAX1,分别转化大肠杆菌BL21和JM109,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达;将构建的真核重组表达质粒免疫小鼠,观
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