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摘要：目的 建立同时测定陇中损伤胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的高效液相色谱梯度洗脱方法。方法 采用C18柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相为乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B）；梯度洗脱0～32 min（A 23%～23%），32～42 min（A 23%～30%），42～67 min（A 30%～46%）；检测波长203 nm；流速1.0 mL/min。结果 三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1进样量分别在1.02～8.50 ?g（r=0.999 5）、0.90～7.50 ?g（r=0.999 0）、1.17～9.75 ?g（r=0.999 6）范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为100.98%（RSD=2.71%）、97.73%（RSD=1.98%）、99.57%（RSD=1.62%）。结论 所用方法简单易行、准确可靠，可作为陇中损伤胶囊的质量控制方法。
关键词：陇中损伤胶囊；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；含量测定
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.10.016
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）10-0041-03
陇中损伤胶囊是甘肃省中医院骨伤科中药注册制剂，主要由三七、乳香、没药等组成，具有活血化瘀、消肿止痛、续筋接骨的作用，临床用于骨折、激素性股骨头坏死、骨质疏松等病症。三七为方中君药，本研究采用高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱法同时测定该胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量，以建立该制剂的质量控制方法。
1 仪器与试药
Waters2695型高效液相色谱仪。人参皂苷Rg1对照品（批号为110703-200424）、人参皂苷Rb1对照品（批号为110704- 200420）和三七皂苷R1对照品（批号为110745-200617）均购自中国药品生物制品鉴定所；陇中损伤胶囊（甘肃省中医药研究
基金项目：兰州市科技局立项课题（2010-1-161）
通讯作者：姜华，E-mail：huajiang931@sina.com
院中药研究所制备，批号20110801、20111201、20110201、20101001）；乙腈为色谱纯，磷酸为优级纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Waters Symmetry C18 Synergi色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；柱温：30 ℃；流动相A为乙腈，B为0.05%磷酸溶液；梯度洗脱：0～32 min（A 23%～23%）；32～42 min（A 23%～30%）；42～67 min（A 30%～46%）；流速：1.0 mL/min；检测波长：203 nm；进样量：10 ?L。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取三七皂苷R1对照品3.42 mg、人参皂苷Rg1对照品3.03 mg、人参皂苷Rb1对照品3.91 mg，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成每1 mL含三七皂苷R1 0.34 mg、人参皂苷Rg1 0.3 mg和人参皂苷Rb1 0.39 mg的对照品混合溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取陇中损伤胶囊3.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，水浴回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例制备不含三七的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.3 阴性干扰试验
取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液，分别按上述色谱条件进行测定，供试品与对照品在同一保留时间有相同的色谱峰出现，而阴性对照溶液无相应的色谱峰。色谱图见图1。
1.三七皂苷R1；2.人参皂苷Rg1；3.人参皂苷Rb1
图1 陇中损伤胶囊HPLC图
2.4 标准曲线与线性关系
精密吸取对照品混合溶液3、5、10、15、20、25 ?L，依法测定，以峰面积积分值为纵坐标、对照品进样量（?g）为横坐标绘制标准曲线，分别得回归方程。三七皂苷R1：Y=232 470X-17 407，r=0.999 5（n=6）；人参皂苷Rg1：Y=233 096X-16 921， r=0.999 0（n=6）；人参皂苷Rb1：Y=171 898X-63 023，
r=0.999 6（n=6）。结果表明，三七皂苷R1进样量在1.02～8.50 ?g范围内、人参皂苷Rg1在0.90～7.50 ?g范围内、人参皂苷Rb1在1.17～9.75 ?g范围内与与峰面积积分值线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取供试品溶液，重复进样6次，测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的峰面积积分值，结果RSD分别为1.6%、1.9%、1.2%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
取同一批号的样品，依法平行制备5份供试品溶液并测定，计算供试品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量，结果RSD分别为1.5%、1.2%、1.8%（n=5），表明方法的重复性好。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，于12 h内每隔2 h进样1次。结果的RSD分别为1.9%、3.0%、2.5%（n=5），表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知含量的同一批样品（三七皂苷R1 0.26%、人参皂苷Rg1 1.60%、人参皂苷Rb1 1.20%）1.5 g，共6份，分别精密加入对照品溶液三七皂苷R1（0.34 mg/mL）2 mL、人参皂苷Rg1（0.30 mg/mL）11 mL、人参皂苷Rb1（0.39 mg/mL）8 mL，按“2.1”项下色谱条件测定各成分的含量。结果见表1。
2.9 样品含量测定
取不同批号的陇中损伤胶囊，按供试品溶液制备方法操作，进样分析，计算4批陇中损伤胶囊样品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量。结果见表2。
3 讨论
由于陇中损伤胶囊为复方制剂，为使色谱图中三七皂苷R1、
人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1获得满意分离，曾用甲醇超声提取法，并按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）三七[2]含量测定项下供试品溶液处理方法进行试验，结果干扰较大，后采用加入甲醇、水浴回流1 h、放冷、再称定质量、用甲醇补足减失的量、摇匀、滤过的方法可除去和减少其他成分的干扰，最终确定该方法为供试品的处理方法。
本试验曾参考文献[1]选用HPLC-ELSD（waters 2424蒸发光散射检测器）测定陇中损伤胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量，但结果并不理想，故选用HPLC梯度洗脱方法测定。曾用乙腈（A）-醋酸水（B）为流动相，但末端波长下基线不平，故选用乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B）作为流动相，在此条件下，基线平稳，3种成分的测定峰能达到良好分离。
参考文献：
[1] 赵宇新，李曼玲.蒸发光散射检测器在中药成分分析中的应用[J].中国中药杂志，2003，28（10）：913.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：11.
（收稿日期：2012-04-25，编辑：陈静）
关键词：陇中损伤胶囊；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；含量测定
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.10.016
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）10-0041-03
陇中损伤胶囊是甘肃省中医院骨伤科中药注册制剂，主要由三七、乳香、没药等组成，具有活血化瘀、消肿止痛、续筋接骨的作用，临床用于骨折、激素性股骨头坏死、骨质疏松等病症。三七为方中君药，本研究采用高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱法同时测定该胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量，以建立该制剂的质量控制方法。
1 仪器与试药
Waters2695型高效液相色谱仪。人参皂苷Rg1对照品（批号为110703-200424）、人参皂苷Rb1对照品（批号为110704- 200420）和三七皂苷R1对照品（批号为110745-200617）均购自中国药品生物制品鉴定所；陇中损伤胶囊（甘肃省中医药研究
基金项目：兰州市科技局立项课题（2010-1-161）
通讯作者：姜华，E-mail：huajiang931@sina.com
院中药研究所制备，批号20110801、20111201、20110201、20101001）；乙腈为色谱纯，磷酸为优级纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Waters Symmetry C18 Synergi色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；柱温：30 ℃；流动相A为乙腈，B为0.05%磷酸溶液；梯度洗脱：0～32 min（A 23%～23%）；32～42 min（A 23%～30%）；42～67 min（A 30%～46%）；流速：1.0 mL/min；检测波长：203 nm；进样量：10 ?L。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取三七皂苷R1对照品3.42 mg、人参皂苷Rg1对照品3.03 mg、人参皂苷Rb1对照品3.91 mg，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成每1 mL含三七皂苷R1 0.34 mg、人参皂苷Rg1 0.3 mg和人参皂苷Rb1 0.39 mg的对照品混合溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取陇中损伤胶囊3.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，水浴回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例制备不含三七的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.3 阴性干扰试验
取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液，分别按上述色谱条件进行测定，供试品与对照品在同一保留时间有相同的色谱峰出现，而阴性对照溶液无相应的色谱峰。色谱图见图1。
1.三七皂苷R1；2.人参皂苷Rg1；3.人参皂苷Rb1
图1 陇中损伤胶囊HPLC图
2.4 标准曲线与线性关系
精密吸取对照品混合溶液3、5、10、15、20、25 ?L，依法测定，以峰面积积分值为纵坐标、对照品进样量（?g）为横坐标绘制标准曲线，分别得回归方程。三七皂苷R1：Y=232 470X-17 407，r=0.999 5（n=6）；人参皂苷Rg1：Y=233 096X-16 921， r=0.999 0（n=6）；人参皂苷Rb1：Y=171 898X-63 023，
r=0.999 6（n=6）。结果表明，三七皂苷R1进样量在1.02～8.50 ?g范围内、人参皂苷Rg1在0.90～7.50 ?g范围内、人参皂苷Rb1在1.17～9.75 ?g范围内与与峰面积积分值线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取供试品溶液，重复进样6次，测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的峰面积积分值，结果RSD分别为1.6%、1.9%、1.2%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
取同一批号的样品，依法平行制备5份供试品溶液并测定，计算供试品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量，结果RSD分别为1.5%、1.2%、1.8%（n=5），表明方法的重复性好。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，于12 h内每隔2 h进样1次。结果的RSD分别为1.9%、3.0%、2.5%（n=5），表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知含量的同一批样品（三七皂苷R1 0.26%、人参皂苷Rg1 1.60%、人参皂苷Rb1 1.20%）1.5 g，共6份，分别精密加入对照品溶液三七皂苷R1（0.34 mg/mL）2 mL、人参皂苷Rg1（0.30 mg/mL）11 mL、人参皂苷Rb1（0.39 mg/mL）8 mL，按“2.1”项下色谱条件测定各成分的含量。结果见表1。
2.9 样品含量测定
取不同批号的陇中损伤胶囊，按供试品溶液制备方法操作，进样分析，计算4批陇中损伤胶囊样品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量。结果见表2。
3 讨论
由于陇中损伤胶囊为复方制剂，为使色谱图中三七皂苷R1、
人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1获得满意分离，曾用甲醇超声提取法，并按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）三七[2]含量测定项下供试品溶液处理方法进行试验，结果干扰较大，后采用加入甲醇、水浴回流1 h、放冷、再称定质量、用甲醇补足减失的量、摇匀、滤过的方法可除去和减少其他成分的干扰，最终确定该方法为供试品的处理方法。
本试验曾参考文献[1]选用HPLC-ELSD（waters 2424蒸发光散射检测器）测定陇中损伤胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量，但结果并不理想，故选用HPLC梯度洗脱方法测定。曾用乙腈（A）-醋酸水（B）为流动相，但末端波长下基线不平，故选用乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B）作为流动相，在此条件下，基线平稳，3种成分的测定峰能达到良好分离。
参考文献：
[1] 赵宇新，李曼玲.蒸发光散射检测器在中药成分分析中的应用[J].中国中药杂志，2003，28（10）：913.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：11.
（收稿日期：2012-04-25，编辑：陈静）