【摘 要】
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目的探讨腺苷对人结直肠癌SW480细胞hMLH1基因甲基化的影响。方法分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞72 h后，采用亚硫酸氢盐测序(BSP)法检测hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况、反转录PCR法检测hMLH1 mRNA的表达、Western印迹法检测hMLH1蛋白的表达、采用流式细胞术检测细胞凋亡率；分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺
【机 构】
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400010 重庆医科大学附属第二医院胃肠外科,400010 重庆医科大学附属第二医院胃肠外科,美国俄勒冈州Legacy研究所,400010 重庆医科大学附属第二医院胃肠外科,400010 重庆医科大
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目的探讨腺苷对人结直肠癌SW480细胞hMLH1基因甲基化的影响。
方法分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞72 h后，采用亚硫酸氢盐测序(BSP)法检测hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况、反转录PCR法检测hMLH1 mRNA的表达、Western印迹法检测hMLH1蛋白的表达、采用流式细胞术检测细胞凋亡率；分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞24、48、72、96 h后通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞活力。
结果腺苷干预后1.5、3.0、4.5 mmol/L各组甲基化程度分别为65%±4%、45%±11%和16%±4%，均明显低于对照组(80%±4%，均P<0.01)；hMLH1 mRNA转录水平、蛋白表达水平、细胞凋亡水平均明显高于对照组(0.230±0.032、0.359±0.029和0.570±0.019比0.079±0.010, 0.353±0.016、0.654±0.018和0.854±0.014比0.126±0.016，11.9%±0.6%、20.0%±1.8%和35.8%±1.8%比3.9%±1.4%，均P<0.01)。MTT法显示不同浓度腺苷干预细胞后，各组细胞活力均明显低于对照组(均P<0.05)，有一定的时间–剂量依赖性。
结论腺苷可逆转hMLH1启动子区异常甲基化状态，使hMLH1表达增加，抑制细胞的增殖，促进细胞凋亡。
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