【摘 要】
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目的 :优化用地高辛标记的原位杂交法检测小鼠海马结构中神经肽Y的表达 .方法 :用体外转录法获得地高辛标记的神经肽Y的反义和正义RNA探针 .用kainicacid诱导小鼠脑组织中神
【机 构】
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西安交通大学卫生部法医学重点实验室,DepartmentofCellBiology,西安交通大学卫生部法医学重点实验室
【基金项目】
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国家留学基金资助项目 (2 2 861 0 1 0 )
论文部分内容阅读
目的 :优化用地高辛标记的原位杂交法检测小鼠海马结构中神经肽Y的表达 .方法 :用体外转录法获得地高辛标记的神经肽Y的反义和正义RNA探针 .用kainicacid诱导小鼠脑组织中神经肽Y表达 ,2h后牺牲小鼠 ,制备 1 2 μm厚的海马组织切片 .然后比较不同pH值 (7.5～ 9.5 )的固定剂 ,不同的固定时间 ,不同的杂交前预处理 ,以及不同预杂交及杂交液对杂交信号的影响 .结果 :从pH 7.5～ 9.5 ,不同碱性固定液对杂交信号没有明显影响 .30min的固定时间足以获得满意的杂交结果 .用蛋白酶K部分消化切片或用TritonX 1 0 0打孔反而降低了杂交信号 .4 0mg/LSalmonspermDNA或 2 5 0mg/LbakersyeastRNA可获得与Denhardt s杂交液相同的杂交信号 .结论 :通过优化 ,我们获得了一种简便而又有效的地高辛标记的原位杂交法 ,用于检测神经肽Y表达
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