【摘 要】
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目的 探讨牛乳腺炎无乳链球菌β溶血素CylE基因对牛巨噬细胞吞噬功能的免疫调理分子机制.方法 利用牛乳腺炎无乳链球菌临床分离野生菌株及β溶血素CylE基因缺失突变株对牛巨噬细胞进行侵染,提取侵染细胞的总mRNA;利用qPCR检测细胞因子Il-8、Il-10、Il-12、TNFα及NOS2的转录水平,ELISA检测相应表达水平.在此基础上,利用免疫印迹实验鉴定无乳链球菌β溶血CylE基因对MAPK信号通路下游接头分子p-38、p44/42的表达及其磷酸化水平的影响,以明确其调控该信号通路的分子机制.结果 巨
【机 构】
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内蒙古民族大学生命科学与食品学院,内蒙古通辽028000;内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心;内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所
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目的 探讨牛乳腺炎无乳链球菌β溶血素CylE基因对牛巨噬细胞吞噬功能的免疫调理分子机制.方法 利用牛乳腺炎无乳链球菌临床分离野生菌株及β溶血素CylE基因缺失突变株对牛巨噬细胞进行侵染,提取侵染细胞的总mRNA;利用qPCR检测细胞因子Il-8、Il-10、Il-12、TNFα及NOS2的转录水平,ELISA检测相应表达水平.在此基础上,利用免疫印迹实验鉴定无乳链球菌β溶血CylE基因对MAPK信号通路下游接头分子p-38、p44/42的表达及其磷酸化水平的影响,以明确其调控该信号通路的分子机制.结果 巨噬细胞-GBSwt组与巨噬细胞-GBSΔcylE组相比,IL-10、TNF-α细胞因子上调,而IL-8、IL-12、NOS2细胞因子表达水平降低,表明无乳链球菌β溶血素CylE对细胞因子IL-10、TNF-α的影响结果一致,相对转录水平均上调,同时抑制细胞因子IL-8、IL-12及NOS2的转录.巨噬细胞-GBSwt组与巨噬细胞-GBSΔcylE组相比,IL-10及TNF-α的相对表达量增加,而IL-8及IL-12的相对表达量下调,差异均具有统计学意义(均P＞0.05),NOS2的相对表达量降低.对MAPK信号通路下游分子磷酸化检测结果显示,无乳链球菌β溶血素CylE基因可激活其下游接头分子p38磷酸化为p-p38,不能激活下游分子p44/42.结论 根据上述结果,p38 MAPK是无乳链球菌溶血素CylE基因发挥免疫调控的识别途径,可能成为对其进行识别钝化,实现信号通路封闭,提高对牛乳腺炎预防与治疗有效性的新靶位,为有效防控该病原菌的危害,保障乳源安全提供新的思路和有效途径.
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