【摘 要】
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目的 探讨大鼠脊髓神经细胞原代培养、鉴定的方法并构建大鼠脊髓损伤体外细胞模型.方法 取孕15dSD大鼠胚胎,分离脊髓组织并采用改良的胰酶消化联合机械分离法进行脊髓神经细
【机 构】
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福建医科大学附属第一医院脊柱外科,福建福州350004;福建省卫生职业技术学院基础部;解放军联勤保障部队第909医院(厦门大学附属东南医院)全军骨科中心
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目的 探讨大鼠脊髓神经细胞原代培养、鉴定的方法并构建大鼠脊髓损伤体外细胞模型.方法 取孕15dSD大鼠胚胎,分离脊髓组织并采用改良的胰酶消化联合机械分离法进行脊髓神经细胞的原代培养;采用免疫荧光三标染色鉴定脊髓神经细胞;应用H2O2干预构建大鼠脊髓损伤体外细胞模型.结果 取孕15d大鼠胚胎采用改良的胰酶消化联合机械分离法成功分离培养原代脊髓神经细胞.免疫荧光染色可见特异的NeuN及βtubulin-Ⅲ染色,符合脊髓神经细胞的特征,经鉴定脊髓神经细胞纯度为90％.应用H2O2干预大鼠原代脊髓神经细胞建立脊髓损伤体外细胞模型时以干预浓度700 μM,时间3 h最为合适.结论 采用改良的胰酶消化联合机械分离法分离培养大鼠脊髓原代神经细胞,细胞产量高、活性好,纯度可以达到90％;采用H2O2干预大鼠脊髓原代神经细胞以建立脊髓损伤体外细胞模型可靠性高,重复性好.
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