【摘 要】
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目的 研究生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)敲低后棕榈酸(palmitic acid,PA)增加肝细胞的脂质沉积及其机制.方法 构建稳定低表达GHR的永生化肝L02细胞株,用不同浓度PA(0、75、150、300 μmol/L)和不同时间(12、24、48 h)处理细胞,检测细胞活力.将实验分为GHR敲低(shRNAGHR)组和空载病毒(Vector)组,分别给予PA干预,油红“O”、BODIPY荧光染色观察细胞内脂质沉积;流式细胞仪检测细胞凋亡和活性氧(reactiv
【机 构】
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400016重庆,重庆医科大学附属第一医院内分泌内科
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目的 研究生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)敲低后棕榈酸(palmitic acid,PA)增加肝细胞的脂质沉积及其机制.方法 构建稳定低表达GHR的永生化肝L02细胞株,用不同浓度PA(0、75、150、300 μmol/L)和不同时间(12、24、48 h)处理细胞,检测细胞活力.将实验分为GHR敲低(shRNAGHR)组和空载病毒(Vector)组,分别给予PA干预,油红“O”、BODIPY荧光染色观察细胞内脂质沉积;流式细胞仪检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;JC-1检测线粒体膜电位的变化;MitoSox荧光检测线粒体内ROS水平,Western blot检测经典线粒体凋亡通路相关蛋白表达;靶向线粒体抗氧化剂MitoTEMPO预处理细胞,观察PA诱导的ROS水平变化及凋亡情况.结果 PA抑制L02细胞存活率并呈浓度依赖性.与对照组相比,150 μmol/L PA处理细胞12、24、48 h,GHR敲低组细胞内ROS水平以及线粒体内ROS水平显著升高,细胞凋亡增加.油红“O”、BODIPY荧光染色均证实GHR敲低组细胞在相同PA刺激下更易发生脂质聚集.GHR敲低组细胞线粒体凋亡通路相关蛋白细胞色素c、Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase3、PARP蛋白水平显著高于Vector组.差异均具有统计学意义(P＜0.05).采用靶向线粒体抗氧化剂MitoTEMPO预处理细胞后,敲低组肝L02细胞凋亡有明显改善.结论 生长激素受体敲低状态下会加重肝细胞脂质沉积和肝细胞凋亡,PA通过线粒体/ROS途径发挥重要作用.
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