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目的:构建人PKM2(M2-typepyruvate kinase)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达,镍离子柱亲和层析法纯化融合蛋白。方法:用PCR方法从宫颈癌Hela细胞全基因组中扩增出目的基因PKM2,通过克隆载体pET30a(+)构建质粒载体pET30a(+)-PKM2。经双酶切和DNA测序证实正确后,用Mi-NTA亲和层析柱进行纯化。结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果和报道一致。经SDS—PAGE分析,纯化后的蛋白约在58KDa位,条带单一,无杂带出现。结论:成功表达纯化了P