论文部分内容阅读
本研究旨在对比分析小鼠骨髓源巨噬细胞(BMDM)和腹腔巨噬细胞(PM)原代培养及巨噬细胞生物学特性差异,为合理选择原代巨噬细胞培养方法提供参考依据.原代培养小鼠BMDM和PM,细胞计数仪测定细胞数量,倒置显微镜观察形态学变化,流式细胞仪检测细胞纯度,CCK-8法测定细胞增殖,中性红吞噬实验测定细胞吞噬功能,实时荧光定量PCR分析巨噬细胞表型变化.结果 显示,BMDM原代培养获取的细胞数量显著高于PM (P＜0.01),PM贴壁及伸展时间早于BMDM. BMDM中F4/80+CD11b+百分比(98.30％±0.53％)高于PM(94.83％±1.42％),但无统计学差异(P＞0.05).在L929细胞条件培养基培养体系中,BMDM增殖能力显著高于PM (P＜0.001).吞噬实验发现,基础状态下BMDM吞噬能力显著高于PM (P＜0.01),经LPS刺激24 h后,除低剂量LPS (0.1 μg/mL)外,BMDM吞噬能力均显著高于PM (P＜0.01或P＜0.001),提示BMDM吞噬能力在基础和激活状态下均强于PM.巨噬细胞极化实验发现,基础状态下Tnfα在BMDM中表达显著高于PM (P＜0.001),Arg1和Ym1在BMDM中表达显著低于PM (P＜0.001),这一差异在极化诱导剂(LPS+IFN-γ或IL-4)处理后依然存在.上述结果表明,原代培养BMDM较PM可获取更多细胞,且两种细胞在吞噬功能和极化状态上存在一定生物学差异,应谨慎合理选择巨噬细胞原代培养方法.