从新疆哈密地区的15个驴乳样品中分离筛选出38株疑似乳酸菌，其中7株菌具有明显凝乳特性。经16S rRNA基因测序鉴定为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）HL12-21、戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）HL29-5、蒙氏肠球菌（Enterococcus mundtii）HL30-3、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）HL21-44、棒状乳杆菌（Lactobacillus coryniformis）HL26-24、弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）HL29-1和乳明串珠菌（Leuconostoc lactis）HL13-23。对7株菌的凝乳时间、产酸能力、后酸化能力、产香能力、感官特性和冷藏期间活菌数等指标检测显示，菌株HL12-21、HL29-5、HL21-44和HL29-1具有更好的产酸、产香能力及弱的后酸化，且单菌发酵乳的色泽、质地及风味综合评分最高；在4℃冷藏20d后，活菌数仍保持在10⁶ CFU/mL以上。此外，比较了7株分离菌株和益生菌L. rhamnosus GG对模拟胃肠液的耐受性，以及抑菌谱、抗生素耐药、抗氧化活性，结果表明菌株HL29-5和HL30-3对以上益生菌筛选指标表现更优，尤其对羟基、DPPH和超氧阴离子自由基的清除率最高（超过30%）。综合我们的研究结果，Pediococcus pentosaceus HL29-5作为具有益生功能的发酵剂在开发特色酸乳生产实践中具有很大的应用潜力。