【摘 要】
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目的 探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,蛋白:apoE,基因:APOE)基因多态性与星形胶质细胞损伤后早期胞内Ca2+浓度的相关性.方法 (1)通过RT-PCR及定点突变技术扩增人源性APOE三
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院神经外科,泸州医学院附属医院神经外科
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目的 探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,蛋白:apoE,基因:APOE)基因多态性与星形胶质细胞损伤后早期胞内Ca2+浓度的相关性.方法 (1)通过RT-PCR及定点突变技术扩增人源性APOE三种等位基因的CDS区,并构建pEGFP-N1-APOE重组质粒;(2)APOE基因敲除鼠星形胶质细胞的原代培养、鉴定;脂质体法将重组质粒转染入星形胶质细胞,并筛选稳定表达APOE信息的细胞株;(3)利用划痕致伤构建细胞损伤模型,于伤后12,24,48及72 h时相点,利用激光共聚焦显微镜(LCSM)技术检测各基因型细胞内Ca2+的荧光强度.结果 各型细胞相对于自身对照(致伤前),Ca2+荧光强度变化差异有统计学意义(P＜0.05).伤后12 h,三组细胞内Ca2+荧光强度较弱,组间差异无统计学意义(P＞0.05);伤后24,48及72 h,三组细胞Ca2+荧光强度进行性增加,且ε4组明显高于ε2和ε3组(P＜0.05).结论 损伤后早期,携带APOEε4等位基因的星形胶质细胞内Ca2+高于ε2和ε3型,提示ε4携带体可能通过伤后Ca2+通道的激活导致急性期伤情加重及不良预后.
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