【摘 要】
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目的: 从丝瓜籽中克隆核糖体失活蛋白luffin-a 基因,并在原核系统进行表达.方法: 根据已报道的cDNA 序列设计引物,用RT-PCR 的方法从成熟的丝瓜籽中克隆luffin-a 基因,克隆后
【机 构】
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军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850
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目的: 从丝瓜籽中克隆核糖体失活蛋白luffin-a 基因,并在原核系统进行表达.方法: 根据已报道的cDNA 序列设计引物,用RT-PCR 的方法从成熟的丝瓜籽中克隆luffin-a 基因,克隆后鉴定核苷酸序列.构建表达载体pET-28a(+)-luffin-a,转化大肠杆菌BL21 (DE3) ,并经IPTG 诱导表达.利用金属离子亲和层析的方法纯化所得目的蛋白.结果: 克隆的luffin-a 基因及其所编码的氨基酸序列与国外报道的核苷酸序列及氨基酸序列同源性分别为95%和92% ,因而所获得的luffin-a基因是丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-a一个新的cDNA序列.经SDS-PAGE分析: luffin-a 主要存在于包涵体中.金属离子亲和层析可纯化目的蛋白.结论: 本研究成功地克隆了luffin-a 一个新的序列,并建立了该蛋白的原核表达系统,同时利用亲和层析可一步法纯化获得目的蛋白.
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