【摘 要】
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目的 构建携带大鼠视黄酸核受体γ(retinoic acid receptor γ,RARγ)的重组腺病毒,为研究RARγ在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成神经分化中的作用奠定基
【机 构】
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重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心,重庆医科大学儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室,重庆医科大学附属儿童医院干细胞实验室
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目的 构建携带大鼠视黄酸核受体γ(retinoic acid receptor γ,RARγ)的重组腺病毒,为研究RARγ在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成神经分化中的作用奠定基础.方法 体外扩增大鼠RARγ基因,将其定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrace-TOX构建重组质粒pAdTrace-RARγ,并在BJ5183菌中与骨架质粒pAdEasy-1重组获得腺病毒载体pAd-RARγ,PacⅠ酶切后转染HEK 293细胞包装腺病毒.腺病毒Ad-RARγ感染大鼠MSCs,Real-time PCR和Western印迹检测 RARγ的表达.结果 PCR,酶切及测序均证实RARγ正确克隆至腺病毒质粒载体中,Ad-RARγ对MSCs感染率达60 %~70 %,并明显增强RARγ基因和蛋白的表达.结论 成功构建携带RARγ的重组腺病毒,并具有上调大鼠MSCs RARγ基因和蛋白表达的功能.
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