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目的
应用无丝3D打印技术常温构建基于胶原/羟基磷灰石的仿生活性人工骨支架,探讨该支架对骨髓基质干细胞(BMSCs)的体外生物学作用。
方法利用无丝3D打印技术在常温条件下基于胶原/羟基磷灰石原料打印仿生活性人工骨,分析支架的物理化学结构,测量其孔隙率和力学强度,评估材料浸提液的细胞毒性。实验分为3组(n=3):空白对照组(无材料),打印支架组,非打印支架组。扫描电镜和免疫荧光观察BMSCs在材料的黏附情况,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法和扫描电镜评价BMSCs在材料上的增殖情况。通过检测碱性磷酸酶活性和成骨相关基因的表达评价支架对细胞的促成骨作用。
结果本实验制备的三维支架孔径可控、大小均一,孔道相互联通,支撑材料横剖面为不规则的蜂窝样结构。打印支架的孔隙率(71.14%±2.24%)显著高于非打印支架(59.04%±2.98%),差异有统计学意义(P<0.05)。打印过程基本保留了材料本身的物理化学结构,不会产生细胞毒性。MTT结果显示:支架种植细胞后7、14 d时打印支架上的吸光度值显著高于非打印支架,差异均有统计学意义(P<0.05)。电镜结果显示细胞可良好黏附于打印支架,并沿着支架的联通通道增殖、迁移。成骨实验检测显示支架有显著性的促成骨作用。
结论常温无丝3D打印胶原/羟基磷灰石支架可在体外提供良好的环境供BMSCs黏附,并促进其增殖及成骨分化。