【摘 要】
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[目的]建立一套利用激光捕获显微切割技术切取梅(Prunus mume Sieb.et Zucc.)的雌蕊并提取微量RNA的技术体系.[方法]以梅品种'大嵌蒂'和'龙眼'的花芽和雌蕊为实验材料,制作石
【机 构】
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南京农业大学园艺学院,南京210000
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[目的]建立一套利用激光捕获显微切割技术切取梅(Prunus mume Sieb.et Zucc.)的雌蕊并提取微量RNA的技术体系.[方法]以梅品种'大嵌蒂'和'龙眼'的花芽和雌蕊为实验材料,制作石蜡切片,比较不同厚度条带的切割效果并选取最佳的条带厚度制作切片;以Leica LMD 7 000激光捕获显微切割系统为实验核心,比较不同激光强度的切割效果,选取切割效果最好的激光强度,分别切取2个梅品种的雌蕊,比较常温保存与液氮保存切割后样品所提取的RNA质量,最终建立适合于梅的激光捕获显微切割提取微量RNA的最佳体系.[结果]在石蜡切片制作过程中,改进了试验材料的贮藏条件(在4℃冰箱低温贮藏),即除渗蜡和制片之外,其他如脱水、透明等步骤都在4℃冰箱中进行,而后再切片制片.经过反复比较,成功确定石蜡切片的最佳条带厚度为10 νm,激光捕获显微切割效果最好的激光强度为30,并且明确切割后液氮保存的切割材料所提取RNA的RIN值比常温保存的高.[结论]改进了石蜡切片制作过程中某些步骤中材料的贮藏温度,确定了适合于梅花芽的切片厚度以及显微切割激光强度,建立了相对简单、稳定且重复性好的利用石蜡切片并联用激光捕获显微切割系统提取微量RNA的体系,为梅等木本植物开展微量RNA提取及后续分子试验的研究提供了基础依据.
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