【摘 要】
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以预培养4d的小麦幼胚愈伤组织为受体,LB培养基上激活培养3d或AB培养基上激活培养4d,并在WCC培养基中重悬的C58c1农杆菌菌系为供体,将含有目的基因、标记基因的pPTN249、pPTN
【机 构】
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中国农业科学院作物育种栽培研究所,,美国内布拉斯加大学生物技术中心,
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以预培养4d的小麦幼胚愈伤组织为受体,LB培养基上激活培养3d或AB培养基上激活培养4d,并在WCC培养基中重悬的C58c1农杆菌菌系为供体,将含有目的基因、标记基因的pPTN249、pPTN254、pPTN270、pSIS-GFP等重组DNA质粒转入了小麦,经在含10～50mg/Lgeneticin(G418)、50mg/Lcefotaxime、50mg/Lvancomycin、50mg/L ticillicin选择培养基上多次选择,移栽前利用nptⅡ EISA检测,移栽后利用叶片离体退绿、PCR和Southern blot 4种方法综合检测,共获得了29株转基因植株,转化频率平均为0.82%.在所获得的转基因植株中,单拷贝整合植株占65.52%.研究结果还表明,不同基因型的转化效率显著不同,除了Bobwhite外,笔者也从扬麦l0号获得了转基因植株;ELISA测定值的高低与外源DNA整合的拷贝数有一定关系;初步建立了农杆菌介导稳定转化小麦的技术体系.
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